叶绿素合成途径中关键基因的表达分析实验汇报.ppt

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2019-06-20 发布于山东
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叶绿素合成途径中关键基因的表达分析实验汇报.ppt

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叶绿素合成途径中关键基因的表达分析——2014年12月第2次实验汇报汇报内容实时定量PCR基本原理实验设计和数据处理实时定量PCR基本原理 1992年，Higuchi最早提出了实时PCR的设想 1996 年Applied Biosystems 公司推出了一种实时荧光定量PCR技术(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR) FQ-PCR 能够实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化实时荧光定量PCR在常规PCR基础上添加了荧光染料或荧光探针，配备荧光检测模块监测扩增时的荧光。FQ-PCR的原理是以荧光共振能量转移原理(fluorescence resonance energy transfer, FRET)为基础的。 FQ-PCR每经过一个循环收集一个荧光强度信号，随着PCR反应的进行，就会得到一条荧光扩增曲线。阈值：是循环开始3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，设定在扩增曲线指数增长期 C(t)值：荧光信号（扩增产物）到达阈值时所经过的扩增循环次数检测方法 TaqMan探针在PCR反应体系加入一个特异的荧光标记探针 SYBR Green I 实验设计应用SYBR Green I法进行相对定量应用2-ΔΔc(t) 法比较两个标本之间在目标基因表达水平上（以内参基因作为参照系）具体差多少 * *