试验十七__猪脾DNA的制备.ppt

* 实验十七 猪脾DNA的制备 一、目的要求 掌握从动物组织中提取、分离、纯化、制备DNA的方法。 二、原理 从生物组织提取、分离、纯化，以制备各种用途的核酸材料，是生物化学和分子生物学工作者必需具备的基本实验技能之一。 由于DNA主要集中在细胞核内，通常采用细胞核含量较大的生物组织作为制备DNA的原料。小牛胸腺组织的细胞核含量比例大，因而DNA含量也高；且其脱氧核糖核酸酶DNase活性较低，在制备过程中由于此酶所引起的DNA降解损失较小，是实验室制备DNA的良好原料。 但是，胸腺来源短缺，往往很难及时满足需要。猪脾 较易获得，它的细胞核含量也高，可以代替胸腺。用猪脾脏组织制备DNA，其纯度和产率均可达到采用小牛胸腺组织制备DNA时的相似水平，制备流程也基本相似。但是必需指出，在破碎脾脏组织以分离制取细胞核时，以及沉淀析出制取DNA钠盐过程中，一定要严格掌握所规定的操作条件并实行监控，这样可以使产率和质量都较为稳定。 在细胞内核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物-核糖核蛋白(RNP)和脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在的。因而，初步的提取，分离技术即是设法将这两大类的核蛋白分开。 在不同的电解质溶液中，RNP及DNP的溶解度有很大的差别。例如：在低浓度的NaCl溶液中，DNP的溶