南农9918感白粉病突变体NM14的创制与在抗病机理分析中的应用.pdfVIP

南农9918感白粉病突变体NMl4的创制及在抗病机理研究中的应用 1．2测序系统…………………………………………………………………25 1．3试验方法…………………………………………………………………25 2、结果与分析……………………………………………………………………26 2．1样本RNA质量检测……………………………………………………．26 2．2测序TAG分析…………………………………………………………．27 2．3Clean tag拷贝数分布统计………………………………………………27 2．4饱和度检测………………………………………………………………28 2．5Clean tag注释……………………………………………………………29 2．6差异表达基因分析………………………………………………………30 3讨论………………………………………………………………………………………………………42 第二节利用组织化学法对突变体感病机理初步研究………………………．44 1材料与方法……………………………………………………………………．．45 1．1试验材料…………………………………………………………………45 1．2试验方法…………………………………………………………………45 2结果与分析……………………………………………………………………．47 2．1接种白粉菌后抗、感材料上活性氧积累情况观察……………………47 2．2接种白粉菌后抗、感材料中细胞死亡情况观察………………………52 2．3接种白粉菌后抗、感材料上白粉菌发育情况观察……………………54 3、讨论……………………………………………………………………………………………………．58 全文结论………………………………………………………………………………。61 参考文献………………………………………………………………………………．63 致谢……………………………………………………………………………………………………………．．69 摘要 南农9918感白粉病突变体NMl4的创制及在抗病机理 研究中的应用 摘要 Pr021基因位于簇毛麦(Haynaldia 过染色体添加、代换和易位转入普通小麦，对国内目前所有小麦白粉茵生理小种表现 免疫，具有抗性强、抗谱广的特点。本实验前期的研究中克隆到了Pr021位置上的一 个抗病关键基因stN-Vo但是Prn21这个位点还有没有其它抗病基因，以及其抗病机 理还不是很清楚。 利用EMS处理携带Pm21的抗病品种南农9918，经多代白粉病鉴定，获得了一 生育期感病突变，苗期分小种鉴定结果表明NMl4．对所有检测的23个生理小种都表 现感病性，23个生理小种中18个达到最高感病级别4级。细胞学检测和分子标记检 测表明，突变体NMl4的感白粉病性状是由6VS上的基因突变导致。通过配置南农 对Fl和F2群体进行抗病性和分子鉴定，结果表明突变体NMl4中发生的是单位点隐 性突变，而且突变的位点在6VS上。 差异表达基因进行筛选和分析，发现突变体NMl4受白粉菌诱导后在转录水平上ROS 的积累量下降、SA信号通路受阻。同时，我们还对感病NMl4和感病扬麦158受白 粉菌侵染后差异表达基因进行筛选和分析，发现在转录水平上6VS上基因发生突变的 感病NMl4和整个6VS缺失感病的扬麦158在对白粉茵的应答上没有明显差异。 本研究用组织化学方法分析了三个抗感材料受白粉菌侵染后活性氧(ROS)积累、 细胞死亡和菌丝发育进程。实验结果表明接种白粉菌后24h，NMl4和南农9918与白 粉菌互作位置活性氧积累存在差异，并且互作位置细胞死亡情况也存在差异；接种白 粉菌48h后，NMl4和南农9918叶片上白粉菌孢子发育进程存在差异，并且吸器指 数也存在差异。NMl4与不合6VS的感病材料扬麦158相比，在白粉茵的发育进程、 吸器形成比例、活性氧的产生等方面不存在明显差异。组织化学分析的结果进一步验 证了突变体NMl4受白粉菌