第9讲-生物信息的传递上(2).pptVIP

3.2 启动子与转录起始 3.2 启动子与转录起始 大肠杆菌RNA聚合酶与启动子的相互作用主要包括启动子区的识别、酶与启动子的结合及σ因子的结合与解离。 3. 2. 1 启动子区的基本结构 启动子是一段位于结构基因5’端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。 转录的起始是基因表达的关键阶段，而这一阶段的重要问题是RNA聚合酶与启动子的相互作用。启动子的结构影响了它与RNA聚合酶的亲和力，从而影响了基因表达的水平。 转录起点是指与新生RNA链第一个核苷酸相对应DNA链上的碱基，通常为嘌呤。把起点5末端的序列称为上游（upstream），而把其3末端的序列称为下游（downstream）。起点为+1，下游方向依次为+2、+3……等，上游方向依次为–1、–2、–3……等等。 转录单元（transcription unit）是一段从启动子开始至终止子（terminator）结束的DNA序列。 启动子区结构特点 Pribnow将RNA聚合酶全酶与模板DNA结合后，用DNaseI降解DNA，得到41～44个核苷酸对的DNA片段。 序列分析发现，在被保护区内有一个由5个核苷酸组成的保守序列，是聚合酶结合位点，称为Pribnow区，其中央大约位于起点上游10bp处，所以又称为–10区。 科学家又从噬菌体的左、右启动子PL及PR和SV40启动子的–35 bp附近找到了另一段共同序列：TTGACA。 现已证实大部分启动子都存在这两段共同序列，即位于–10 bp处的TATA区和–35 bp处的TTGACA区，它们是RNA聚合酶与启动子的结合位点。 图3-6 大肠杆菌RNA聚合酶全酶所识别的启动子区 真核基因的启动子在–25～–35区含有TATA序列，在–70～–80区含有CCAAT序列（CAAT box），在–80～–110含有GCCACACCC或GGGCGGG序列（GC box）。 习惯上，将TATA区上游的保守序列称为上游启动子元件（upstream promoter element，UPE）或称上游激活序列（upstream activating sequence，UAS）。 如果把Pribnow区从TATAAT变成AATAAT就会使该启动子发生下降突变；如果增加Pribnow区的共同序列，将乳糖操纵子的启动子中的TATGTT变成TATATT，就会提高启动子的效率，称为上升突变。 已在SV40的转录单元上发现其转录起始位点上游约200bp处有两段72bp长的重复序列，它们不是启动子的一部分，但能增强或促进转录的起始，因此，称这种能强化转录起始的序列为增强子或强化子（enhancer）。 TATA区的主要作用是使转录精确地起始。如果除去TATA区或进行碱基突变，转录产物下降的相对值不如CAAT区或GC区突变后明显，但发现所获得的RNA产物起始点不固定（图3-10）。 CAAT区和GC区主要控制转录起始频率，基本不参与起始位点的确定。 SV40的早期基因，缺少TATA和CAAT区，只有6个串联在上游–40～–110位点的GC区；而组蛋白H2B，不含GC区，但有两个CAAT区，一个TATA区。 表3-5 真核细胞中的部分转录调控因子分析 3. 3 原核与真核生物mRNA的特征比较 mRNA在大肠杆菌细胞内占总RNA的2%左右，tRNA占16%，rRNA则占80%以上。 真核细胞的mRNA往往以较大相对分子量的前体RNA出现在核内，只有成熟的、相对分子质量明显变小并经化学修饰的mRNA才能进入细胞质，参与蛋白质的合成。所以，真核细胞mRNA的合成和功能表达发生在不同的空间和时间范畴内。 3. 3. 1 原核生物mRNA的特征 1)半衰期短。 原核生物中，mRNA的转录和翻译是在同一个细胞空间里同步进行的，蛋白质合成往往在mRNA刚开始转录时就被引发了。 大多数细菌mRNA在转录开始1分钟后就开始降解。mRNA降解的速度大概只有转录或翻译速度的一半。科学家发现每过大约2分钟，体系中出现新生蛋白质的速度就下降50%。 2)原核细胞的mRNA（包括病毒）有时可以编码几个多肽，而真核细胞的mRNA最多只能编码一个多肽。 我们把只编码一个蛋白质的mRNA称为单顺反子mRNA（monocistronic mRNA），把编码多个蛋白质的mRNA称为多顺反子mRNA（polycistronic mRNA）。 几乎所有mRNA都可以被分成3部分：编码区和位于AUG之前的5’端上游非编码区以及位于终止密码子之后不翻译的3’端下游非编码区。编码区从起始密码子AUG开始经一连串编码氨基酸的密码子直至终止密码子。 第一个蛋白质合成终止以后，核糖体分解成大、