菌种及其扩大培养4学时.pptVIP

2.2.3 接种龄与接种量 不同品种或同一品种的工艺条件不同，其接种龄是不一样的。 一般要经过多次试验、考察其发酵罐中产量的多少来确定最适的接种龄。 * 接种龄对嗜碱性芽孢杆菌 产碱性蛋白酶的影响 * 接种量：是指移入的种子液体积（V1）和接种后培养液体积（V1+V2）的比例（V1/ V1+V2）。 接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度。 一般接种量：5-15％，过大过小都不好，最终以实践定，如大多数抗生素为7-15%。但是一般认为大一点好。 2.2.3 接种龄与接种量 接种量较大：可以缩短发酵罐中菌丝繁殖到达高峰的时间，使产物的形成提前到来。 这是由于种子量多，同时种子液中含有大量体外水解酶类，有利于对基质的利用，并且生产菌迅速被占据了整个培养环境，则对减少杂菌生长的机会。 接种量过多：往往使菌丝生长过快、培养液粘度增加，造成溶解氧不足，而影响产物的合成。 接种量过少：延长发酵周期，往往还会引起其他不正常情况，如产生大量菌丝团，而使产量降低。 * * 接种量对碱性蛋白酶产生的影响 近年来，生产上多以加大种子量及采用丰富培养基作为获得高产的措施。 获得高产的其它措施： 双种法：两个种子罐接种到一个发酵罐中。卡那霉素生产中采用双种比单种的发酵单位提高8%，而且达到产量高峰的时间提前。 倒种法：以适宜的发酵液倒出适量给另一发酵罐作种子，一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。 链霉素酵中，使用倒种法比单种的发酵单位提高19%。而四环素发酵采用双种效果并不显著。 * * 2．2．1 菌种移接 2．2．2 种子罐级数的确定 2．2．3 接种龄与接种量 2．2．4 种子质量判断 2.2 生产车间种子制备 菌种在种子罐中的培养时间较短，可供分析的参数较少，种子的内在质量难以控制。 为了保证各级种子移种前的质量，除了保证规定的培养条件外，在过程中还要定期取样，测定一些参数以观察基质的代谢变化及菌丝形态是否正常。 * 2.2.4 种子质量判断 * 生产中通常测定的参数： pH值； 磷、糖及氨基氮的含量； 菌丝形态、菌丝浓度、培养液外观（色素、颗粒等）； 其它如酶活等； 用酶活力来判断种子的质量是一种新的尝试。如土霉素 发酵中，种子液的淀粉酶活力与发酵单位有一定关系。 * 表 淀粉液化速度同龟裂链霉菌合成土霉素能力的关系 * 2.3.1 原材料质量 原料质量波动是种子质量不稳定的主要原因 1）产地、品种、加工方法及用量，水质硬 度等； 2）原材料质量波动，起主要作用的是无机离子含量不同。 2.3 影响种子质量的因素 2.3.2 培养条件 1）温度：显著影响斜面孢子质量 2）湿度：对斜面孢子质量有较大影响 3）通气量：需要足够的通气量 2.3.3 孢子斜面冷藏时间 * * 2.4 种子质量控制措施 种子质量的最终指标：考察其在发酵罐中所表 现出来的生产能力。 首先，必须保证生产菌种的稳定性； 其次，是提供种于培养的适宜环境保证无杂菌 侵入，以获得优良种子。 1）保证生产菌种的稳定性 检查稳定性方法： 取出少许保藏菌种置于灭菌生理盐水中，逐级稀释，在含有琼脂培养基的双碟上涂布培养，菌液稀释度以双碟上所生长的菌落不至过密为宜。挑出形态整齐、孢子丰满的菌落进行摇瓶试验，测定其生产能力，以不低于其原有的生产能力为原则，并取生产能力高的菌种备用。 一般，不管用什么方法保藏菌种，一年左右都应作自然分离一次。 * * 2）保证无杂菌侵入通常方法： 种子液显微镜观察 种子液无菌试验 主要依据，通过双碟涂布、琼脂斜面划线和 酚红肉汤培养； 生化分析：营养消耗速度、pH变化、溶氧利用、色泽气味等。 * 本章小结 基本概念：种子扩大培养、种子罐级数、一~三级种子罐扩大培养（一~四级发酵）、接种龄、接种量 种子扩大培养的目的和种子的要求是什么？ 菌种保藏采取了哪些手段？保藏方法有哪些？ 为什么种子要逐级扩大培养？种子罐级数确定的依据是什么？什么情况下可采用一级种子？ 影响种子质量的因素有哪些？ 控制种子质量有哪些措施？ * * 第一节 * * 第四节 * 1-3节 * * 4节 * 第二章菌种扩大培养 * 生物反应工程 陈宏文 博士 华侨大学生物工程与技术系 * 第二章 菌种及其扩大培养 引言 种子扩大培养的目的与种子要求 2.1 实验室种子制备 2.2 生产车间种子制备 2.3 影响种子质量的因素 2.4 种子质量控制措施 目前工业规模的发酵发酵罐容积已达几十立方米或几百立方米。如按百分之十左右的种子量计算，就要投入几立方米或几十立方米的种子。 要从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子，是