一种新地血小板保存方法——冰冻干燥血小板地研究.pdf

引言 持结构的完整性，再输注给血小板缺乏患儿或动物出血模型也未表现出足够的止 血作用。早期探索的失败，让人们对这种方法产生了怀疑，于是这一研究就被搁 MS．等人发展了这项技术，并利用 置了多年。直到七十年代术八十年代初，Read 处理后冰冻干燥血小板保持了vWF受体活性的特点对人和动物血浆中的vWF进 MS． 行检测[8-JOl。从此，对冰冻干燥血小板的研究又焕发出新的生机。1995年，Read 等人采用1．8％多聚甲醛处理血小板，清洗后悬浮于人血自蛋白保护液中，在一20～40 ℃条件下冰冻干燥，然后保存在．80C冰箱中【11l。冰冻干燥血小板用咪唑缓冲液再 水化。电镜观察再水化冰冻干燥血小板形态正常，流式细胞术测定表面受体表达 与『F常m小板相似。在狗、鼠止血时间延长模型输注实验中，证明冰冻干燥血小 板有恢复止血时间的作用。另外，用1．8％多聚甲醛处理血小板能有效地除去细菌 和病毒【121。在接下来的研究中，他们在Baumgartner灌流室中对冰冻干燥人血小板 SJ．等人利用葡萄糖孵育血小板后进行冰 的活化和粘附进行了测定㈣。同时，Barry 冻干燥，获得了75％～85％的回收率【¨】。最近，WolkersWF．等人在血小板的保存体 系中添加了海藻糖【”】，使得冰冻干燥血小板再水化后达到了85％的存活率，同时 再水化冰冻干燥血小板对凝血酶、胶原蛋白、ADP和瑞斯托霉素的反应与新鲜血 小板无显著差别。通过傅立叶变换红外光谱学分析表明这种再水化冰冻干燥血小 板的膜以及膜蛋白成分与新鲜血小板相似。 本实验拟建立血小板的实验室评价方法；探索海藻糖以及多聚甲醛处理后对 血小板冰冻干燥的影响、乙醛处理对冰冻干燥血小板的保护作用；研究不同的影 响因素对血小板数、血小板平均体积、血小板分布宽度、血小板聚集率、血小板 膜糖蛋白表达以及血小板表面活化标志物表达的作用。进而提供一套全新的实验 室冰冻干燥血小板技术，为实现冰冻干燥血小板的临床应用奠定基础。 第一部分血小板的实验室评价 第一部分血小板的实验室评价 血小板是血液的重要组成成分之一，对于维持血管壁的完整性有着重要意义， 在血栓形成与止血等多种生理、病理过程中起着重要作用。对血小板进行实验室 评价对于了解血小板的结构功能十分重要。 1材料与方法 1．1试剂和仪器 1．1．1主要试剂 1．11．1血小板：自北京血液中心购得PC。 1．1．1．2生理盐水：购自北京双鹤药业股份有限公司。 1．1．1．3 7．4)： OBS㈣(pH 巴比妥钠 1．1559 NaCl 1．4769 O．1MHCl 43ml 生理盐水800ml 蒸馏水 定容至1000ml 1．1．1．5抗体： FITCanti—human CD62P(p-选择素)美国Southern Biotechnology公司 FITCanti—humanCD41a 美国e-bioscience公司 R．PEanti．humanCD42b 美国e-bioscience公司 FITCmouseI control 美国Southern IgGisotype Biotechnology公司 R—PEmouseI control 美国Southern IgGisotype Biotechnology公司 1．1．16GPRP乙酸栽：购自美国Sigma公司。溶于生理盐水