人教版高中生物选修3专题1 第1节DNA重组技术的基本工具课件.pptVIP

3．“分子运输车”——载体 (1)作用：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。 (2)作为载体必须具备的条件： ①具有一个或多个限制酶切割位点，该切割位点必须位于载体本身必需的基因序列之外。 ②能够自我复制或整合到染色体DNA上后随染色体DNA复制。 ③带有标记基因，便于筛选。 ④本身是安全的，不能对受体细胞产生危害。 ⑤大小适中，便于操作。 但实际上，天然载体一般不会同时具备上述条件，所以在基因工程中需要对载体进行人工改造。现在所用的质粒几乎都是人工改造的。 质粒是基因工程最常用的载体，它的主要特点是(　　) ①能自主复制　　　　　　②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A．①③⑤⑦ B．②④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ [解析]　质粒存在于细菌和酵母菌等生物中，是一种很小的环状DNA，上面有标记基因，便于在受体细胞中检测。质粒在受体细胞中能随受体细胞DNA的复制而复制，能进行目的基因的扩增和表达。 [答案]　C 质粒是基因工程最常用的载体，下列关于质粒的说法正确的是(　　) A．质粒在宿主细胞内都要整合到染色体DNA上 B．质粒是独立于细菌拟核DNA之外的小型细胞器 C．基因工程操作中的质粒一般都是经过人工改造的 D．质粒上碱基之间数量存在A＋G＝U＋C [答案]　C [解析]　基因工程使用的载体需有一至多个酶切位点，具有自我复制的能力，存在标记基因，对受体细胞安全，且分子大小适合。而自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。而质粒进入宿主细胞后不一定都要整合到染色体DNA上，如宿主细胞是细菌细胞则不需整合。质粒是小型环状双链DNA分子而不是细胞器，也不会有碱基U。 思 维 升 华 1．与遗传有关的各种酶的比较 名称 作用 参与的生理 过程与应用 作用位点 (如下图) DNA 连接酶 连接两个DNA片段 基因工程 a 限制性核 酸内切酶 能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 a 名称 作用 参与的生理 过程与应用 作用位点 (如下图) DNA 聚合酶 在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧核苷酸 DNA的复制 a RNA 聚合酶 在核糖核苷酸链上添加单个核糖核苷酸 转录 a 解旋酶 使核碱基间氢键断裂形成单脱氧核苷酸链 DNA复 制及转录 b 逆转录酶 以RNA为模板合成DNA 逆转录、 基因工程 — 特别提醒：①DNA连接酶和DNA聚合酶的作用都是催化形成磷酸二酯键，而不是氢键，氢键是分子间的静电吸引力，不需要通过酶的催化形成。②DNA连接酶只能在两个DNA片段间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有DNA片段上，且需要以一条DNA链为模板。③目前发现的DNA连接酶不具有连接单链DNA的能力。 2．限制酶在原核生物中的作用 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成一套完善的防御机制，以防止外来病原微生物的侵害。限制酶在细菌内会将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。而限制酶不会切断自身DNA，是因为在原核生物细胞中，其DNA分子或者不具备这种限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 知 识 构 建 应 用 探 究 目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如下图所示。 (1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于_________。 (2)pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR I只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________。 (3)pBR322分子中另有单个的BamH I限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复________________键，成功获得了重组质粒，说明______________________________ (4)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈