细胞培养技术_第一讲.ppt

细胞培养技术 大连大学医学院 郑丛龙 绪 论 绪 论 细胞培养的基本概念 细胞培养的发展简史 细胞培养的优缺点 细胞培养的应用领域 细胞培养（cell culture) 细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行体外培养和研究的技术。 即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。 细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种。 群体培养（mass culture）：即将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）：即将少数细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 原代培养第4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，个别集落形成，细胞围绕中心漩涡状排列﹙×100﹚ 原代培养第7天，多个集落形成并融合﹙×100﹚ 组织培养常用术语 原代培养（primary culture）：从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。 传代培养（passage culture）：将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代培养。 注：传代（passage，subculture） 细胞系（cell line）：原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。 细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或标志，并能稳定保持这些特性的培养物。 克隆（clone）：指单个细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。 细胞周期（cell cycle)：从上一次分裂结束至下一次分裂终了结束经历的时相过程，由分裂间期和分裂期构成。 二倍体细胞系或株（diploid cell line or strain)： 具有二倍体核型的细胞系或株。 有限细胞系或株：指仅能有限传代次数，通常50代左右，然后衰亡。 无限细胞系或株：具有无限增值能力的细胞系或株。 细胞凋亡：指体内外因素触发导致的程序性细胞自杀死亡。 干细胞（stem cell）：指体内未分化的具有继续分化潜能的细胞。 细胞接触抑制（cantact inhibition）：贴壁生长的正常细胞一旦汇合、相互接触后变停止分裂。 细胞杂交（cell hebridization）：指2个或多个细胞融合导致一个多核细胞。 细胞培养的发展简史 德国人Roux（1885）用温生理盐水体外培养鸡胚组织神经板并存活数天，被认为是组织培养的萌芽试验。 1903年Jolly用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞生活一月，提示组织或细胞离体后，在人工培养条件下，仍能生存。 1907年Harrison创建了“哈里森悬滴培养法”，将蛙胚原始脊髓节段，移到事先滴有从成体蛙淋巴囊吸取的新鲜淋巴的盖玻片上，淋巴很快凝固，使组织小块固定在一定的位置上。然后将盖玻片倒置于一块中央凹陷的厚载玻片上，盖玻片的周缘用蜡封固。蛙胚神经组织存活了数周，由此建立了体外培养组织和细胞的基本模式系统。 1923年，Carrel设计了卡式瓶培养法，扩大了组织的生存空间。 美国学者Lewis WH等人工合成培养基代替血浆和胚胎提取液等天然培养液的培养方法。 1957年Dulbecco 等采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单层培养成了组织培养普遍应用的技术。促进了细胞系(cell line)的建立。 近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术，各国建立细胞库 我国组织培养的发展 20世纪30年代传入我国。 20世纪50年代起步。 20世纪70年代，成为医学和生物学研究中普遍应用的手段。 细胞培养的优点 1、活细胞： 能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动。 2、可控制： 3、应用广：  领域多：医学研究、生物技术、基因工程等 对象广：各种动物（低等动物--高等动物--人类） 一种动物（不同年龄、不同组织） 正常或异常（肿瘤） 4、较经济： 可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。 细胞培养的缺点 人工模拟的培养环境与体内相比仍然存在一定差异，培养的细胞或组织，其形态或功能会发生不同程度的