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课题3 酵母细胞的固定化 一、固定化酶的应用实例——生产高果糖浆 1.反应原理:葡萄糖 果糖。 2.葡萄糖异构酶的优缺点: (1)优点:这种酶的_______较好,能持续发挥作用。 (2)缺点:酶溶解于葡萄糖溶液后,无法从糖浆中回收,造成很大 的浪费。 _____________ 葡萄糖异构酶 稳定性 3.使用固定化酶的生产原理:将葡萄糖异构酶固定在颗粒状的 _____上,再将这些酶颗粒装入_______中,柱子底端装上分布着 许多小孔的筛板。_______无法通过筛板上的小孔,而_______ ___可以自由出入。 4.生产操作: (1)将_______溶液从反应柱的上端注入。 (2)使葡萄糖溶液流过反应柱,与___________________接触。 (3)转化成的果糖,从反应柱的下端流出。 载体 反应柱 酶颗粒 反应溶 液 葡萄糖 固定化葡萄糖异构酶 二、固定化技术的方法 1.固定化酶和固定化细胞技术的概念:是指利用物理或_____ _____将酶或细胞固定在一定空间内的技术。 2.常用的方法:包埋法、___________和物理吸附法。 (1)酶适合采用化学结合法和___________固定化,而细胞多采 用_______固定化。 (2)包埋法固定化细胞是将微生物细胞均匀地包埋在不溶于水 的___________中。常用的载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、 醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。 化学 方法 化学结合法 物理吸附法 包埋法 多孔性载体 三、固定化酵母细胞实验操作 1.酵母细胞的活化:向盛有干酵母的小烧杯中加入_______,让 处于_____状态的酵母菌恢复正常的生活状态。 2.配制CaCl2溶液:配制物质的量浓度为0.05 mol·L-1的_____ 溶液。 3.配制海藻酸钠溶液:用酒精灯加热时,边加热边_____,要用小 火,或者_________,直至完全溶化。 蒸馏水 休眠 CaCl2 搅拌 间断加热 4.海藻酸钠溶液与酵母细胞混合:将溶化好的海藻酸钠溶液冷 却至室温,加入已活化的酵母细胞,进行充分搅拌,使其混合均 匀,再转移至_______中。 5.固定化酵母细胞:以_____的速度缓慢地将注射器中的溶液滴 加到配制好的_________中,浸泡___min左右。 6.用固定化酵母细胞发酵:将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用 _______冲洗2~3次,放入用于发酵的葡萄糖溶液中,再置于 25℃下发酵24 h后,会发现有_____产生,同时有酒味散发。 注射器 恒定 CaCl2溶液 30 蒸馏水 气泡 【思考辨析】 1.判断正误 (1)酶的固定化提高了酶的催化效率。( ) 【分析】酶的固定化使酶能够反复利用,提高了酶的利用率, 但并未提高酶的催化效率。 (2)柱子底端分布着许多小孔的筛板属于半透膜。( ) 【分析】半透膜是只允许离子和小分子自由通过的膜结构。 葡萄糖异构酶已经被固定在载体上,与反应溶液的分离属于 较大固体颗粒与液体的分离,已超出半透膜分离溶质分子的 范畴。 × × (3)固定化酵母常采用化学结合法和物理吸附法。( ) 【分析】化学结合法和物理吸附法是固定化酶常采用的方法, 固定化酵母一般采用包埋法。 (4)酵母细胞的固定化可提高发酵产品的质量。( ) × √ 2.问题思考 (1)固定化酶和固定化酵母在营养物质提供方面有何差别? 提示:固定化酶不需要提供营养物质,固定化酵母需要提供营养物质以保证酵母菌存活。 (2)如果制作的凝胶柱颜色过浅,呈白色,则说明了什么? 提示:说明海藻酸钠浓度偏低,固定的细胞数目少。 一、直接使用酶、固定化酶、固定化细胞催化的比较 直接使用酶 固定化酶 固定化细胞 酶的 种类 一种或几种 一种 一系列酶 制作 方法 化学结合法、 物理吸附法 包埋法 是否需要 营养物质 否 否 是 直接使用酶 固定化酶 固定化细胞 催化 反应 单一或多种 单一 一系列 反应 底物 各种物质(大分子、小分子) 各种物质(大 分子、小分子) 小分子 优点 催化效率高、低耗能、低污染等 被固定的酶可重复使用 成本低,操作更容易 直接使用酶 固定化酶 固定化细胞 缺点 ①溶液中的酶不能回收利用,增加了生产成本 ②反应后酶会混在产物中,可能影响产品质量 一种酶只能催化一种化学反应,而在生产实践中,很多产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能得到的 固定后的细胞与反应物不容易接近,尤其是大分子物质,可能导致反应效率下降等 【易错提醒】有关固定化细胞与固定化酶的两点提醒 (1)固定化细胞使用的都是活细胞,应该为其提供一定的营养物质,而固定化酶不需要。 (2)固定化细胞由于固定的是完整的细胞,因而酶的环境较稳定,所以对酶的活性影响较小,更能抵抗外界环境的变化。
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