一是细菌细胞并没有接合.ppt

1.性菌毛识别受体细胞，使供体和受体细胞紧密相连，很快在接触处形成胞质桥。胞质桥是F质粒转移的通道。 2.F质粒上traYZ基因表达，产生的核酸内切酶在oriT处一条单链上切开一个切口，并以5′端为首通过胞质桥通道进入受体，而互补链留在供体。 3.单链DNA进入受体细胞，DNA两端再连接起来形成环状DNA分子，供体和受体细胞中的单链DNA再分别以自己为模板进行复制，形成双链DNA分子。 当接合作用完成后，受体细胞也变成了含有F因子的F+细胞，即：F+×F-→2F+。 2. Hfr×F-杂交 Hfr×F-杂交与F+×F-杂交有着相同的过程：包括细胞间接触、胞质桥形成、链的断裂、单链DNA的转移。 F质粒在Hfr细胞中已和染色体结合成一个复制子，所以F质粒在接合时能带动染色体DNA进入受体。 在Hfr×F-杂交中，杂交结果仍是Hfr细胞和F-细胞。 3. F’×F-杂交 F质粒在脱离Hfr细胞的染色体时也会发生差错，从而形成带有细菌染色体基因的F′质粒。 第三节 转导 (transduction) 转导：是利用噬菌体为媒介，将供体菌的部分DNA转移到受体菌内的现象。（普遍，稳定） 局限性转导：被转导的DNA片段仅仅是那些靠近染色 体上溶源化位点的基因 转导 普遍性转导：任何供体的染色体都可以转移至受体细胞 1952年Lederberg和他的学生Zinder把鼠伤寒沙门菌的一个突变菌株LT22(trp-)和另一个突变菌株LT2(his-)在基本培养基上进行混合培养，结果在107细胞中得到大约100个原养型菌落。 一、普遍性转导 (generalized transduction) 1.转导现象的发现 为了进一步验证鼠伤寒沙门菌是否通过细胞接合而产生重组体又进行了U形管实验。 Davis把这两种缺陷型菌株A和B分别注入底部用烧结玻璃滤板隔开的U形管的两臂中。 滤板只允许培养基和大分子物质通过，细菌不能透过。 培养一定时间后，从两端分别取样、离心后洗涤，再涂布于基本培养基平板上，结果未发现有原养型菌落出现。 结果表明：混合培养时得到的重组子不是转化的结果，同时也证明重组子的出现需要两亲本细胞的直接接触。 说明沙门菌的基因重组并不是通过细胞接合，而是通过某些可过滤因子而发生的。 LT2菌株 LT22菌株 中间用滤板隔开 通过一系列的实验证实可过滤因子是温和噬菌体P22。 这就是最早发现的转导现象。 普遍性转导中研究最多的是沙门菌噬菌体P22和大肠杆菌噬菌体P1。 与噬菌体对宿主DNA的降解机制和噬菌体对DNA的包装机制有关。 如果宿主DNA被噬菌体完全降解，则不能进行有效的包装。另外，噬菌体包装位点(packaging site，简称pac位点)的特异性不能太高，否则也不能将宿主DNA包被在噬菌体内。 2.普遍性转导噬菌体 提问：是不是所有噬菌体都能进行普遍性转导？ 3. 普遍性转导的机制 在形成 噬菌体颗粒时，少数噬菌体将细菌的DNA误认作是它们自己的DNA而包被在蛋白外壳内，形成转导噬菌体。 在噬菌体感染的末期，细菌染色体被断裂成许多小片段 供体细菌染色体DNA，则与受体细胞内的染色体DNA发生同源重组，整合到受体菌的染色体上。 携带供体基因的噬菌体侵染受体菌时，便将供体基因注入到受体菌中。 二、局限性转导(specialized transduction) 局限性转导：是指以噬菌体为媒介，只能将供体菌特定的一个或几个基因转移到受体菌中的转导现象。 局限性转导，是1956年Morse和Lederberg在研究E.coli K12 λ噬菌体时发现的。 1 λ原噬菌体位于K12菌株染色体上半乳糖利用基因（gal）和生物素合成基因（bio）之间。 1 当λ原噬菌体脱离染色体而成为游离噬菌体，约有10-6个原噬菌体发生错误切离而形成缺陷噬菌体。这种缺陷噬菌体要么带有gal基因，称为λdgal，要么带有bio基因，称为λdbio。 高频转导 低频转导 缺陷噬菌体整合到寄主染色体相同的位点上形成稳定的转导子。 正常λ噬菌体整合到寄主的染色体上后，产生两个杂合(细菌/噬菌体)att位点，λdgal 缺陷噬菌体就可以整合到该位点上。 正常λ噬菌体帮助λdgal 缺陷噬菌体整合和繁殖，因此被称为助手噬菌体（helper phage）。 这种转导子不稳定，因为原噬菌体很容易被诱导切离下来。 在这种切离的裂解物中，有一半是正常λ噬菌体，另一半为λdgal 缺陷噬菌体。如果用这种裂解物去转导另一个Gal-菌株，其转化频率理论上可达50%，所以也称之为高频转导。 思考题： 5 在Hfr×F-杂交中，为什么得不到含F的杂交子？ 6 试述普遍转导的机制？ 7 绘图说明λ噬菌体低频