北京师范大学附属教育集团安师大微生物学实验考核题库(刘爱民微生物实验指导).docxVIP

1、观察什么微生物需要用油镜，为什么？ 答：要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造，最好使用油镜头。 油镜的焦距和工作距离最短。油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之的介质不是一层空气，而是一层油脂，称为“油浸系”。利用油镜的目的是增加显微镜的分辨力。 ? 2、用油镜观察要注意什么？滴的是什么油？起什么作用？ 答：使用油镜前要先擦拭镜头，注意镜头与载破片的距离。 使用油镜时，需在玻片上滴加香柏油。这是因为油镜的放大倍数较高，而透镜很小，光线通过不同密度的介质物体（玻片→空气→透镜）时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少，视野较暗，物体观察不清。如在透镜与玻片之间滴加和玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野亮度增强，物象清晰 ? 3、培养基配好后为什么必须立即灭菌如何检查灭菌后的培养菌是无菌的 答：配好的培养基如果不立即灭菌，微生物会利用培养基中的营养物质滋生，最后导致微生物大量繁殖，培养基营养物质流失，培养基变浑浊。将灭菌后的培养基放入37摄氏度温箱中培养24~48小时，无菌生长即可。 ? 4、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内的冷空气排尽？ 答：在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 ? 5、高压蒸汽灭菌方法温度，压力，时间 答：0.1MPa,121.3度，15---30MIN ? 6、为什么芽孢染色需要加热，机理 答：细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色,若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状).芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上后又难以脱色这一特点而设计的.所有的芽孢染色法都基于同一个原则:除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽孢着色,再使菌体脱色,而芽孢上的染料则难以渗出,故仍保留原有的颜色,然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢,便于观察。 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。 ? 7、观察青霉、曲霉时，为什么要把所取材料放在水中漂洗后再做水装片？ 答：因为青霉和曲霉产生了很多孢子，在制作成装片前，用水漂洗掉一部分孢子会使实验观察效果更佳。 ? 8、酵母菌观察时用美兰染色能区分死、活细胞，其原理是什么？ 答：美兰是一种无毒性染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美兰对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美兰由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或新陈代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 ? 9、革兰氏染色时涂片为什么不能太厚？染色时为什么要让玻片冷却后才滴加染料？ 答：A、以免脱色不完全造成假阳性现象。B、大凡加热染色都不能把染料蒸干,染料被蒸干后积聚在玻片以及菌体上,干扰光线穿透影响镜下观察菌体结构情况.而加热是为了促进染液进入菌体内从而使其着色。 ? 10、土壤微生物分离纯化实验过程中，酚加到什么培养基中？链霉素加到什么培养基中，它们有什么作用？ 答：酚加到高氏I号培养基中。链霉素加到马铃薯葡萄糖培养基中。加入抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他杂菌，从而得到纯菌株。 ? 11、测了酵母菌大小时，在10X40状态下校正，若目镜测微尺40小格与镜台测微尺10小格相重合，现用目镜测微尺测得某个酵母菌的长度是5格，宽度是2格，求其酵母菌的大小是多少？ 答：目镜测微尺每小格的长度=两对重合线间镜台测微尺格数X10/两对重合线间的目镜测微尺格数=10X10/40=2.5 长：5