第6章 环境毒理学常用实验方法.pptx

第6章 环境毒理学常用实验方法;Outline;§1 毒理学实验基础; 实验动物（laboratory animal） 经人工培育，对其携带微生物实行控制，遗传背景明确，来源清楚，可用于科学研究的动物。 温血动物(恒温动物) 兔、豚鼠、大鼠、小鼠 有时也用猴、狗、猫等;狗 ;实验动物的选择;实验动物的选择;实验动物的选择;个体选择 ;§1.2 常用染毒途径和方式;(1) 经口染毒 ① 灌胃 用灌胃器将所应投给动物的药灌到动物胃内, 直接灌入胃内，不与口腔及食道接触, 给予的化学物剂量准确。 ;(1) 经口染毒 ② 喂饲 将化学物溶于无害的溶液中拌入饲料或饮用水中，使动物自行摄入含化学物的饲料或水，然后依每日食入的饲料与水再推算动物实际摄入化学物的剂量。; ② 喂饲 优点：接触化学物的方式符合人类接触污染食物与水的方式，方法简便、易操作。 缺点: 进食时浪费、损失饲料多，摄入的量不准确； 如果化学物有异味，动物可能拒食； 如果化学物在室温下可以挥发，或在饲料中和水中可以水解，则剂量也不准确； 有经呼吸道与皮肤交叉吸收的可能； 更适宜进行多日染毒，急性毒性试验一般不用之。;③吞咽胶囊 将所需剂量的受试化学物装入药用胶囊内，强制放到动物的舌后咽部迫使其咽下。 此法剂量准确，尤其适用于易挥发、易水解和有异臭的化学物。 兔、猫及狗等较大动物可用此法。 ;（2）经呼吸道染毒 凡是气态或易挥发的液态化学物均有经呼吸道吸入的可能，在生产过程中形成气溶胶的化学物也可经呼吸道吸入。 类型: 动物自行吸收 静式吸入染毒 动式吸入染毒 人工动物气管注入 人工动物气管注入——将液态或固态外源化学物注入肺内。这是一个手术过程，仅适用于制造化学物对肺脏损伤模型的制备，而不用于一般毒性研究。;静式吸入染毒 在一定容积的染毒柜内加入一定量受试物，造成含一定浓度受试物的空气环境，使受试动物在规定时间内, 经吸入而达到染毒，适用于短时间染毒的试验。 动式吸入染毒 采用机械通风为动力，连续不断地将含有已知浓度受试物的新鲜空气送入染毒柜内，并排出等量的污染气体，使染毒浓度保持相对稳定，这样可使染毒时间不受染毒柜(室)容积的限制，也可避免动物缺氧、CO2积聚、温度增加等对试验结果的可能影响，适用于较长时间以及反复染毒的试验使用。;A ;（3）经皮肤染毒 液态、气态和粉尘状外源化学物均有接触皮肤的机会。 能经皮肤吸收的化学物主要以扩散方式经过皮肤角质层屏障，在表皮角质细胞的间质中充满非极性的脂类物质。脂溶性化学物主要通过这种途径渗透入皮肤，角质层薄的皮肤部位更易吸收。;实验前详细检查去毛部位皮肤有无擦伤、红肿、皮疹等异常现象，剔除不合格动物。 染毒时按单位体重确定给予所需毒剂的容量。 接触时间应与人实际接触该物质的时间相仿。;（4）其它途径染毒 有时需对外源化学物进行绝对毒性或比较毒性研究，或进行一些必要的特殊研究(如静脉注射毒物动力学、代谢研究、急救药物筛选等)，往往用注射途径染毒。 静脉注射:大鼠、小鼠尾静脉，兔耳缘静脉 肌肉注射 皮下注射 腹腔注射:小动物;§2 动物实验的一般操作方法;§2.1 急性毒性试验;二、急性毒性试验的目的 探求化学物的致死剂量，以初步评估其对人类的可能毒害的危险性； 求该化学物的剂量-反应关系，为其它毒性实验打下选择染毒剂量的基础。;（1）急性毒性测定 确定一次染毒的 LD50或LC50； （2）经皮肤染毒实验 考察受检化学物质能否经皮肤进入体内，LD50； （3）局部作用实验 通过使受检化学物质直接接触皮肤及眼结膜等试验，研究其对生物体局部有无刺激、腐蚀及其他危害作用。;（4）中毒症状的观察 据染毒动物症状及体征，粗略了解毒物作用的程度和可能作用部位。 （5）功能及病理组织学检查 选择必要的功能指标，寻求毒作用剂量与功能改变的关系，确定急性阈剂量； 通过病理组织学检查，进一步了解毒作用部位及毒害程度。;（一）半数致死量(LD50、LC50)的测定 1. 动物准备 一般采用小动物，如小鼠、大鼠、豚鼠等。 实验动物应预先观察7天左右，以了解其健康情况及