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PAGE PAGE 3 GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS12030.3 v.A GENMED电转感受态细菌DH10B细胞产品说明书（中文版） 主要用途 GENMED电转感受态细菌DH10B细胞是一种通过甘油溶液制备的，耐受电击刺激，快速吸收DNA的特定状态的常用大肠杆菌细胞。其适宜于原核或真核生物基因组DNA导入、大质粒转染、噬菌体表面展示技术、重组DNA实验等。产品即到即用，性能稳定，操作方便，电转状态恒定，转染效率高，可达1 X 109转化菌/微克pUC19。 技术背景 细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。电转感受态细菌DH10B细胞是通过电休克而不是热休克的简便快速高效的技术方法。其基因型为F- mcrA ?（mrr-hsdRMS-mcrBC）?80?lacZ ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?（ara，leu）7697 galU galK ?－rpsL nupG ，可以在Bluo-gal或X-gal琼脂平板上进行蓝白斑筛选；其含有recA1和endA1突变，而确保质粒中外源基因片断插入稳定，改善质粒DNA提取的质量。其转化效率可达1.0 X 109转化菌/微克pUC19。 产品内容 GENMED电转菌液（Reagent A） 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存在－70℃冰箱里，避免反复冻融，有效保证6 用户自备 SOC培养液：用于转化菌的复苏培养（GMS12002） 琼脂平板：用于转化菌的筛选 电穿孔仪：用于转化电击 恒温摇床：用于转化细菌的复苏培养 转化步骤 实验开始前，开启电穿孔仪，并设置好操作条件：2.5kV，200Ω，25μF；同时准备好含有筛选性抗生素的LB琼脂平板。然后进行下列操作。 从－70℃冰箱里取出1管（100微升）GENMED电转菌液（Reagent A） 置于冰槽里融化 移取xx微升GENMED电转菌液（Reagent A）到预冷的1.5毫升离心管 加入1微升（100纳克总量）DNA（注意：理想比例为1：10至20（载体容量：感受态容量）） 用枪头轻轻搅动细胞 转移到预冷的0.1厘米电击杯 轻轻敲击桌面，使DNA/菌液混匀液沉于管底 即刻放进电穿孔仪的电击槽里 推动到电击位置完成电击（注意：操作安全） 加入1毫升室温预热的用户自备的SOC培养液 转移到新的1.5毫升离心管 放进37℃摇床孵育60分钟，速度为220RPM 稀释（1：100） 移取100微升到LB琼脂平板 使用铺板棒轻轻均匀铺板 室温下静置15分钟 倒置琼脂平板 放进37℃培养箱孵育24小时 注意事项 本产品为总量0.5毫升规格，严格保存在－70℃ 操作时，须戴手套 操作时，注意安全 文库构建，建议使用GENMED电转超级感受态细菌DH10B细胞—GMS12030.4 未用完的感受态细胞，即刻放回－70℃冰箱保存 每冻融1次，转染效率下降2倍 建议转染后，使用SOC培养液复苏培养，否则转染效率2至3倍下降 建议使用纯化的不含盐离子的DNA，至关重要 建议使用Bio-Rad GenePulserII电穿孔仪 使用pUC19对照培养板计算转化效率（CFU/微克）： 【CFU（对照组）?皮克pUC19】X 【1 X 106皮克/微克 X（细菌总容量，毫升?铺板容量，毫升） X 稀释倍数】 例如：10皮克pUC19，1毫升菌量，1：100稀释，铺板50微升，产生50菌落： CFU/微克＝【50CFU?10皮克】 X【1 X 106皮克/微克 X （1?0.05）X100】＝1.0 X 1010 本公司提供系列感受态菌产品 质量标准 本产品经鉴定性能稳定 本产品经鉴定转染效率高 使用承诺 杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。 友情提醒 IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。 订购信息 单组分订购信息 编号 名称 规格 GMS12030.3 GENMED电转感受态细菌DH10B细胞 微升 GMS12030.3A GENMED电转菌液（Reagent A） GM