细胞转染与传代演示文稿.ppt

注意事项: ? 本台电脑专用于显微镜图像采集，禁止使用未格式化的优盘拷贝文件及其他用途。 ? 不要频繁开关荧光电源，打开后至少使用半小时才能关闭；关闭后至少半小时才能重新打开(确保汞灯冷却，汞灯寿命约200小时)。 ? 保持显微镜各部件(如载物台)的整洁，目镜、物镜、聚光镜等光学部件表面有灰尘时，应先用洗耳球吹掉，再用擦镜纸蘸乙醚:乙醇(7:3)混合液由内向外螺旋形轻轻擦拭干净。 ? 用后关闭显微镜电源、电脑，登记使用情况。 ? 每次使用后，应待仪器（电源、灯等）冷却，再用防尘罩盖上显微镜和附件。 细胞转染和传代 关于转染（transfection） 细胞转染是指将外源的DNA，RNA等导入真核细胞 的技术，是实验室工作中经常涉及的基本方法。 外源核酸在细胞中的定位 物理介导：电穿孔法、显微注射 化学介导：磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法 生物介导：病毒介导法 常用的转染方法 细胞转染的类型 瞬时转染：外源DNA/RNA不整合到细胞的染色体中，因此一个细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天（24-72小时）。 稳定转染：外源DNA可以整合到细胞的染色体中，通常需要经过反复筛选才能得到稳定转染的同源细胞系。 脂质体转染细胞的原理 脂质体转染细胞的优点：操作方便，安全性高。 转染对细胞的要求： 细胞生长状态决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前