人类x和Y精子的分离密度梯度离心法.docVIP

人类x和Y精子的分离密度梯度离心法 (一)原理 x、Y精子尽管由平衡沉淀作用获得的密度是相似的，但在分离介质中的沉降速度不等，x精子沉降速度比Y精子快；这样在一个由低到高的密度梯度中，通过适当的离心力作用下，经过一定时间离心，可在不同密度梯度中分离出富含x或Y精子的标本。 (二)试剂与器材 (1)lOxEaIles液； (2)l×Earles液； (3)：Percoll液； (4)Nycoprep(密度为1．15g／mL，渗透压为290mOsm／kg)； (5)14mL离心管。 (三)方法 100％Percoll液制备：9份Percoll+1份10×．Eartes液+100IU／mL青霉素+1．89g／L Nat_IC03，密度为1．11g／mL，渗透压280mOsm／kg。 在使用前一天，将100％Percoll液放在5％c02培养箱中平衡8～10 min，贮存于4cC冰箱；在使用当天，将100％Perc0儿液1000g离心10 min，以沉淀任何二氧化硅颗粒凝集物。然后用l×Eailes液将100％：Pel，coll液稀释成各种所需浓度。 (1)8层Percoll梯度离心法在14mL离心管中，由下至上从84％到35％Percoll液，按7％递减，各加1．0mL，形成7层：Pelcoll梯度；取1．OmL液化精液加入Per