荧光法定量测定维生素B2的含量.docVIP

荧光法定量测定维生素B2的含量 一、实验题目：荧光法定量测定维生素B2的含量 二、实验目的： 1．掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。 2．了解荧光分光亮度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。 三、实验原理： 维生素B2（又叫核黄素，V B2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为： 由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。 维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质—光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。 在稀溶液中，荧光强度F在物质的浓度c有以下关系： F=2.303φIoεbc 当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系： F=Kc 这是荧光光谱法定量分析的依据。 四、仪器与试剂： 1．仪器 荧光分光亮度计；石英皿：1cm；容量瓶：50mL。 2．试剂 维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)：准确称取10.0000mg维生素B2置于100mL烧杯中，加1%乙酸溶液使其溶解，定量转移入1000mL容量瓶中，并用1%乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，将溶液保存在冷暗处。1%乙酸溶液。 五、实验内容与步骤： 1．系列标准溶液的制备 取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀。待测。 2．待测样品溶液的制备 取维生素B2样品液2.0mL于25mL容量瓶，加水稀至刻度，摇匀，待测。 3．激发光谱和荧光发射光谱的绘制 分别设置λem=522.0nm为发射波长，在200~500nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。从激发光谱图上可找出其最大激发波长为λex=371.0nm。 设置λex为371.0nm，在400~600nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。从荧光发射光谱上可找出其最大荧光发射波长λem和荧光强度，比较不同激发波长下获得的最大荧光发射波长λem和荧光强度。 4．标准溶液及样品的荧光测定 将激发波长固定在371.0nm，荧光发射波长为522.0nm，测量上述系列标准维生素B2溶液的荧光发射强度。以溶液的荧光发射强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，制作标准曲线。 在同样条件下测定未知溶液的荧光强度，并由标准曲线确定未知试样中维生素B2浓度，计算药片中维生素B2的含量。 六、数据记录与结果分析 1．激发光谱和荧光发射光谱绘制过程中实验数据记录如下： 激发波长λex/nm 371.0 最大荧光发射波长λex/nm 522.0 荧光强度 156.1 2．标准溶液及待测溶液的浓度和荧光强度记录如下： 维生素溶液浓度/（μg/mL) 0．1 0．2 0．3 0．4 0．5 待测溶液 相对荧光强度 34．75 68．24 99．37 130．3 156．3 101.4 在λem=522.0nm为发射波长，200~500nm范围内扫描，得知最大激发波长为371.0nm，设置λex为371.0nm，在400~600nm范围内扫描，最大荧光发射波长为λem为522.0nm,荧光强度为156.1，将λem固定在522.0nm，λex固定为371.0nm，系列标准维生素B2的荧光发射强度制得的标准曲线相关系数为0.99905,线性关系良好标准曲线方程为： 可求得被测液的浓度为： 即原溶液浓度为： Y= 6.244+ 305.16*X R=0.99905 标准工作曲线的方程为Y= 6.244+ 305.16*X，相关系数为0.99905，线性关系较好。根据上述数据可得待测溶液浓度为0.31μg/mL。