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生物科学与工程系生物化学实验教学研究室 大连理工大学 环境与生命学院 实验六 聚合酶链式反应 指导老师：苏 乔 副教授 电话606 概 述 1、常用PCR反应条件 94℃ 5min 94℃ 30s 72℃ 7min 4℃∞ 55℃ 45s 35cycle 72℃ 1min 退火温度根据扩增特异性调整 延伸时间根据扩增片段长度调整 2、防止污染，设置严格的对照体系， 包括：阳性对照 空白对照 阴性对照 植物基因组中β－actin基因片段的电泳图 1-3：小麦；4-6：烟草；7-9：玉米；10-12：大豆 M：DL2000 E：空白对照 3、如果PCR扩增出现非特异条带，解决方 案包括： a.提高退火温度 b.Hot-start PCR c.Touch-down PCR d.重新设计引物 技术要点及注意事项 1、同时进行多个PCR反应，仅DNA样品 不同，可配置反应混合液后分装 2、常用模板量： 质粒DNA 植物DNA 可设计梯度实验进行优化 思 考 题 1、如何确定PCR反应体系正常且无污染？ 2、如果PCR扩增中出现非特异条带，其可能的原因是什么？应如何解决？ 再 见 ！ 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室 大连理工大学 环境与生命学院
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