VB2的测定和方法学.pptVIP

组长:刘晓斌 组员:夏敏，夏亮，乐乐， 谢晔，孙敏杰 指导老师:陈旭，戴小峰 VB2的生理作用 VB2，又称核黄素，分子式C17H20N4O6，它是人体必需的13种维生素之一，作为维生素B族的成员之一， VB2对于人体的生理作用为： 促进发育和细胞的再生； 促使皮肤，指甲，毛发的正常生长； 帮助消除口腔内，唇，舌的炎症； 增进视力，减轻眼睛的疲劳； 和其他的物质相互作用来帮助碳水 化合物，脂肪，蛋白质的代谢。 国内外研究方法 近年来对VB2测定方法报道较多，如： 高效液相色谱法 流动注射化学发光法 多元线性分光光度法 荧光分光光度法 这些方法操作麻烦，时间较长，本实验用紫外分光光度法和荧光法测定VB2含量 。 实验思路 1.VB2片的紫外测定 标准曲线的绘制 VB2片的浓度计算 结论：所测样品的含量为4.563mg/片 ①VB2紫外线性范围浓度：0.2~24mg/LA=0.0312c+0.0069R2=0.9998 ②VB2的紫外加标回收率测定 ③紫外分光光度法VB2检出限 2.VB2片荧光法测定 荧光工作参数 ①荧光线性范围浓度：0.048~0.96mg/L  I=465.728c+4.562 R=0.9998 ②VB2荧光药片加标回收率 ③荧光光度法检出限 方法学评价 VB2片t检验法 t= S平= t=28.480t0.01 结论紫外分光光度法和荧光分光光度法差异极显著 VB2片测定小结 紫外：VB2片含量片4.563mg/片 荧光： VB2片含量5.874mg/片 分析： 由于两种方法的检出限不同，因而VB2片稀释倍数不同，并在稀释操作过程中产生误差，致使检测结果有较大差异 紫外分光光度法和荧光分光光度法差异极显著 实验思路 果蔬中维生素B2的紫外测定 结论与分析讨论 结合以上几张果蔬的紫外全扫描图可以看出实验中所选的几类果蔬在波长445nm附近没有很特征的吸收峰，故不适宜使用紫外可见分光光度法来测定其中VB2的含量。 经过查阅资料，讨论分析，初步得出可能原因：样品的预处理比较粗糙，果蔬中有物质在波长445nm附近较大范围亦有吸收会影响VB2的吸收峰；VB2的浓度经过预处理而降低了，如抽滤过程中舍去了初滤液，将样品液定容等。 果蔬中维生素B2的荧光测定 空白溶剂荧光全扫描 果蔬样品的测定 数据处理及计算 样品VB2 含量(μg/ 100g) = ( FAO- FA) / ( FSO - FS) ×c ×50 ×100/w FAO ——样品加入Na2S2O3前的荧光值 FSO——标准液加入Na2S2O3前的荧光值 FA——样品加入Na2S2O3后的荧光值 FS——标准液加入Na2S2O3后的荧光值 w——样品重量(g) c——标准液的浓度 添加硫代硫酸钠所制成的标准曲线 以标准曲线法测定样品中VB2含量 果蔬VB2测定小结 紫外果蔬中VB2的预处理比较粗糙，VB2的浓度经过预处理而降低了，如抽滤过程中舍去了初滤液，将样品液定容等。使得紫外分光光度法无法测得果蔬中VB2的含量。 比较单点法和标准曲线两种方法求得果蔬VB2的含量，两者之间有较大的差异，这是因为果蔬中除VB2还有其他物质与硫代硫酸钠反应，而标准维生素B片中没有，使计算误差产生。 结论 VB2的荧光特征性强于紫外特征性。检测VB2时，运用荧光分光光度法优于紫外分光光度法。 荧光检出限低于紫外，能测定较低浓度VB2溶液。 硫代硫酸钠具有还原性，且安全无害，可代替含有较强毒性的连二亚硫酸钠作为还原剂，与维生素B2反应，效果十分明显。 创新点 在现有的大多数文献中，测定VB2所用的试剂为连二亚硫酸钠，此试剂对人体危险有毒，操作困难，所以本实验用硫代硫酸钠替代连二亚硫酸钠，硫代硫酸钠对人体无毒无害，并将硫代硫酸钠配制成溶液参与实验中的反应，操作方便简单。 本实验中，首次采用添加硫代硫酸钠还原维生素B2方法制作标准曲线来测定VB2含量。这是其它文献中没用采用过的方法。 收获 我们学会了分析课题，查找文献并设计实验方案，以及对实验的严谨态度。 学会独立操作紫外分光光度计和荧光分光光度计，并了解其工作原理。 了解了维生素B2的特性及富含维生素B2的食物。 59.340 182.340 0.384 45.795 136.877 0.288 40.820 114.774 0.240 25.024 70.523 0.144 21.259 59.686 0.120 17.654 48.236 0.096 12.670 36.310 0.072 9.893 25.083 0.048 5.419 13.397 0.024 加入后荧光值 加入前荧光值 VB2标液浓度 (mg/L) I=316.55c+0.1245 R2=0.999