猪胸膜肺炎放线杆菌快速检测技术的分析.pdfVIP

彭小牛猜胸膜肺炎放线杆荫t赶速榆钡4扳术的研究 猪胸膜肺炎放线杆菌快速检测技术的研究 全文摘要 1猪胸膜肺炎放线杆菌毒素lV部分基因片段的克隆及表达 体中，经测序后与GenBank中公布的核酸序列比较，二者同源性达100％，从 诱导后，进行SDS．PAGE实验，目的基因获得高效表达，免疫转印鉴定呈阳性， Apxiv部分基因片段体外成功表达。 Resin 度为0．625ug／ml，血清检测稀释度为l：100，抗原与抗体的最佳反应时间为90 分钟。用该ELISA检测了72份实验室制备的猪血清样品，结果预示表达蛋白可 用于区分灭活疫苗免疫和野毒感染。 以三氯乙酸．丙酮法提取的App的荚膜多糖粗提物capsularpolysaccharide， ug／ml， 血清检测稀释度为l：100，抗原与抗体的最佳反应时间为90分钟。应用该ELISA 和猪传染性胸膜肺炎『F向间接血凝诊断试剂盒同时检测250份临床样品，试剂盒 的检出率为81．2％．Cps．ELISA的检出率为88．8％，二者的符合率达91．4％。 可以监测疫苗免疫后的抗体水平，而rApxⅣ．ELISA能区分灭活疫苗免疫和野毒 感染。 3猪胸膜肺炎放线杆菌快速PCR检测 而对马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、产 争殳摘要 肠毒素大肠杆菌等均未扩增出任何条带。用相应的限制性内切酶分别酶切PCR CFU。将建立 扩增产物。均得到与预期一致的结果；PCR检测的敏感度可达10 的PCR方法直接用于检测人工发病病料和临床疑似病料，得到较好的结果。 关键词胸膜肺炎放线杆菌；ApxlVjtz．N；克隆和表达；荚膜多糖；表达蛋白 rApxIV；问接ELISA；外膜蛋白：聚合酶链反应 彭小‘扛斩胸膜肺炎放线杆菌佻速榆测技术的11J『究 on Detection of StudyRapid Technique Actinobacillus ABSTRACT 1 and ofonesectionof from expression ApxⅣgene Cloning．sequencing Actinobacillus pleuropneumoniae Asectionof ofActinobacillus Apxivgene pleuropneumoniaeamplifiedby was 8-T transformedinto E．coli PCRclonedinto hoststrain DH5a’ pMDlvector,and The of clonewas and resultof plasmidpositive enzymolysizedsequenced．The showedthatthe was1 withthereferace sequencing consistency00％compared DNAwascloned