实验四细菌转导.pptVIP

厦门大学生命科学学院 实验目的 通过大肠杆菌噬菌体专一性转导半乳糖发酵基因学习掌握局限性转导的原理，掌握转导实验的基本方法 噬菌体介绍 噬菌体结构 噬菌体组装 λ噬菌体载体 证明遗传物质是DNA而非蛋白质的Hershey-Chase实验 溶源菌的形成 实验原理 转导定义： 以噬菌体作为媒介将一个细胞（供体）的遗传物质传递给另一个细胞（受体）的过程。 普遍性转导 P1和P2 局限性转导 λ λdg λdb 实验材料 菌株：E.coli k12(λ)gal+ k12Sgal- 用品：Eppondoff离心管(1.5ml/4.5ml) Tip枪头(1ml/200ul/20ul) 培养基(肉汤固体/半固体/加倍肉汤/EMB) 试剂：氯仿、磷酸buffer 实验步骤 噬菌体的诱导和裂解液的制备 取4ml gal+菌液至离心管，4000rpm，5min 倒去上清，加3ml磷酸buffer，震荡悬浮 将悬浮液倒入培养皿，UV照射处理10s 加入3ml加倍肉汤，37℃避光培养2h 取0.8ml培养液于小离心管，加入0.2ml氯仿剧烈震荡半分钟，6000rpm, 10min 得到的上清液即噬菌体裂解液 实验步骤 噬菌体效价测定 取10ul裂解液至990ul磷酸buffer, 震荡混匀，再从中取10ul裂解液至990ul磷酸buffer，震荡混匀，得到10-6稀释液 取0.1ml稀释液和0.5ml gal-受体菌至半固体肉汤培养基(3ml)管中，混匀，倒入肉汤固体培养基中，摇匀，凝固后37℃培养过夜 观察出现的噬菌斑数，计算效价 实验步骤 转导方法 取1ml gal-受体菌，4000rpm, 5min, 弃上清，加入1ml磷酸buffer，制成受体菌悬浮液 取一环受体菌在EMB培养基上划线(如图)， 37℃培养1.5h, 再滴加裂解液后培养2天 各加50ul gal-受体菌和裂解液于EMB培养基上, 混合涂布；另外再作对照涂布培养 作业 填表 结果分析，计算噬菌体效价和转导频率 效价(单位/ml)=斑数x稀释倍数x取样量 转导频率=(转导子数/ml)/(噬菌体数/ml)x100% 画图表示λdg转导颗粒转导gal-细菌的过程 * * 实验四 细菌转导 噬菌体是指细菌病毒 生活周期：吸附、侵入、复制合成、装配、释放 烈性噬菌体 如T4 温和噬菌体 如?、Mu-1、P1和P2等 ?噬菌体整合进大肠杆菌染色体中的固定位点上，这个位点在gal(半乳糖代谢基因)和bio(生物素合成基因)之间，这位点称为BOB’，它与?的附着位点POP’有相同的核心序列区，由15bp组成，它们通过同源单交换发生整合，形成溶源菌。 混合液 对 照