紫外分光光度计的使用原理和方法课件.pptVIP

1.4 影响紫外-可见吸收光谱的因素 物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收强度等都可能发生变化。 1.温度 在室温范围内，温度对吸收光谱的影响不大。 精品文档 2. 溶剂 注意如下几点： （1）尽量选用低极性溶剂； （2）能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性； （3）溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。 3. pH值 精品文档 1.5 紫外-可见吸收光谱的应用 紫外-可见吸收光谱除主要可用于物质的定量分析外，还可以用于物质的定性分析、纯度鉴定、结构分析。 1.定性分析 精品文档 2.纯度的鉴定 用紫外吸收光谱确定试样的纯度是比较方便的。 如蛋白质与核酸的纯度分析中，可用A280/A260的比值，鉴定其纯度。 精品文档 3.结构分析 紫外-可见吸收光谱一般不用于化合物的结构分析，但利用紫外吸收光谱鉴定化合物中的共轭结构和芳环结构还是有一定价值。 例如，某化合物在近紫外区内无吸收，说明该物质无共轭结构和芳香结构。 精品文档 §2. 朗伯-比尔定律 设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia,透射光强度为 It，反射光强度为Ir，则 I0= Ia+ It+ Ir 由于反射光强度基本相同，其影响可相互抵消，上式可简化为： I0= Ia+ It 一、吸光度和透光度 精品文档 吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示， 即 A=lg1/T=lgI0/It 透光度：透光度为透过光的强度It与入射光强度I0之比，用T表示： 即 T= It/I0 精品文档 二、朗伯-比尔定律 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= κ cl 式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。 精品文档 三、吸光系数 当l以cm，c以g/L为单位，κ称为吸光系数，用 a表示。 A= a cl a的单位为L/(g.cm) 精品文档 当l以cm，c以mol/L为单位，κ称为摩尔吸光系数，用 ε表示。 ε的单位为L/mol.cm，它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。 摩尔吸光系数 精品文档 比吸光系数 比吸光系数是指百分含量为1%， l为1cm时的吸光度值，用 表示。 精品文档 四、偏离朗伯-比耳定律的因素 （1）入射光为非单色光 （3）光程的不一致性。 光源