原代细胞培养和死活细胞鉴别血球计数实验SOP.docxVIP

原代细胞的培养与鉴定标准操作流程（SOP ） 一、 【实验目的】 了解原代细胞培养的基本方法及操作过程（此处以动物小鼠为例）0 学习细胞计数、营养液的配制等，初步掌握无菌操作方法。 了解细胞损伤的过程及死活细胞的鉴定方法。 二、 【实验原理】 （-）细胞原代培养 原代细胞培养是指直接从动物或者人体内获取的细胞、组织和器官，经体外 培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内 取岀所需的组织（或器官）,经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使 其不断的生长及繁殖。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期 生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、 无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注 意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。 （-）细胞死活鉴定 在显微镜下活细胞细胞膜完整、立体感强，胞质透明度好，颗粒状物质少; 死细胞膜破裂，无立体感，细胞通透性差，有颗粒状物质、空泡。 培养好的细胞培养液颜色呈土黄色，透明度好，不浑浊，发亮，有浑浊可能 是污染初期或细胞太多。 染色排除法是生物研究中判断细胞活性的一种常用方法，简便，易于操作实 验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。原理：因为活细胞的 细胞膜具有选择透过性，细胞不需要的物质通常不能进入