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纸层析法鉴定转氨基作用 * * [目的] 1.验证氨基酸的转氨基作用 2.掌握纸上层析法分离和鉴定氨基酸的基本原 理和方法。 [原理] 在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α-氨基生成相应的α-酮酸，而另一种α-酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程，称为氨基酸的转氨基作用。 层析理论 层析法（色谱法）：是利用混合物各组分物理、化学性质（如溶解度、吸附能力、电荷和分子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不同的区域，借以将各组分分离。 固定相——滤纸结合的水 流动相——乙醇 由于混合物中的有效成分和杂质受固定相的阻力和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度不同，有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、吸附和交换作用，最终结果是使混合物得到分离。 [步骤] 1.制备肝匀浆 2.转氨基反应 取干净试管2支，分别标明测定管与对照管，按下表操作。 37℃水浴20min 10d 10d α-酮戊二酸 10d 10d 丙氨酸 沸水浴10min 37℃水浴10min 10d 10d 肝匀浆 对照管 测定管 管号 试剂（滴） 3.准备：取直径15cm圆形滤纸1张，用圆规在滤纸正中作一半径为1cm的小圆圈，用铅笔通过圆心作两点互相垂直的线，并在两线外端等距离点4个原点，标明测、对、谷、丙。在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔芯粗细），另取同类滤纸小片1.5cm×3cm，下三分之二剪成须状。将其卷成圆筒如灯芯状，插入小孔（略突出于滤纸面）
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