大孔吸附树脂分离甜菊糖甙的研究.doc

PAGE PAGE 2 大孔吸附树脂吸附法分离甜菊糖甙的研究 一、实验目的和要求 1. 掌握大孔吸附树脂吸附法的基本原理。 2. 掌握用大孔吸附树脂分离生物活性物质的操作过程。 3. 了解树脂吸附分离技术在发酵工业中的应用。 二、实验原理 大孔吸附树脂为具有立体结构的多孔性海绵状聚合物，是以苯乙烯和丙酸酯等为单体，加入乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，它们相互交联聚合形成了多孔骨架结构。是一类含离子交换集团的交联聚合物，它的理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，不受无机盐类及强离子低分子化合物的影响。 大孔吸附树脂的吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果，分子筛性是由于其本身多孔性结构的性质所决定。大孔吸附树脂以范德华力从很低浓度的溶液中吸附有机物，其吸附性能主要取决于吸附剂的表面性质。大孔树脂的多孔性，使其具有巨大的比表面积，能够依靠和被吸附分子之间的范德华力或氢键进行物理吸附；同时，其多孔性还对分子量大小不同的化合物具有筛分作用。因此，大孔树脂为吸附性和筛分性相结合的分离材料，根据有机化合物吸附力的不同及分子量的大小，在大孔树脂上经一定的溶剂洗脱而分开。 三、实验器材与试剂 1. 器材 层析柱，天平，烘箱，烧杯，量筒，漏斗和表面皿等。 2. 试剂 大孔吸附树脂，甜菊糖甙，乙醇等。 四、操作方法 1. 树脂的预处理和再生（略）。 2. 装柱 在层析柱内加入约30~50 mL水，用记号笔做好标记（此即为装入树脂体积）。 装柱过程：层析柱中加入约1/4柱体积的去离子水，然后用漏斗将树脂小心沿壁倒入柱中，装柱时应注意不使树脂层中有气泡，控制柱底出水速度，不能让柱中水流干或溢出来。装柱完成后，将水位控制至树脂面上，加入少量去离子水，保持一段液柱。 3. 水洗 利用重力作用加入约2倍柱体积去离子水，流速控制在柱体积的5~7%（5~7%vvm），洗至流出液中无乙醇味，将水位控制至树脂面上，加入少量待测液，保持一段液柱。 4. 吸附 取定量（约为树脂体积的两倍）固形物含量为U1的甜菊糖甙溶液缓慢注入树脂柱内，流速为5~7%vvm，流出液用量筒收集，并不断取样分析，直到流出液含显著甜味为止，停止上柱。记录上柱总量V1（柱出口上柱流出液量）；降液面至树脂界面。 用2倍树脂体积的纯水按5~7%vvm流速洗柱，降液面至树脂界面。 5. 洗脱 用两倍树脂体积的60%乙醇溶液洗脱甜菊糖甙，流速为5~7%vvm，收集洗脱液，测量体积V并测定甜菊糖甙含量。 6. 纯水再生树脂，用2倍树脂体积纯水以5~7%vvm流速再生树脂。 7. 测定洗脱液中甜菊糖甙含量 取一定量（2 ml）洗脱液于表面皿中，105 ℃烘箱内干燥至恒重，计算洗脱液中甜菊糖甙浓度U。 8. 计算吸附过程回收率=解析总量/上柱总量 V和U——分别为洗脱液液的体积（ml）和洗脱液甜菊糖甙含量（g/ml） V1和U1——分别为通入柱的料液体积（ml）和甜菊糖甙含量（g/ml） 五、思考题 （一）预习 1. 简述大孔吸附树脂的吸附原理，为什么用乙醇可以将甜菊糖甙洗脱？ 2. 简述影响大孔吸附树脂吸附性能的因素。 （二）实验结果和讨论 计算树脂吸附过程的回收率。