液相色谱PPT课件.pptVIP

第四章 高效液相色谱法 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） §4.1 高效液相色谱分析概述 液相色谱，是以液体溶剂为流动相的色谱方法。经典液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1-5cm, 长50-500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在150-200?m范围内。即使这样，流速仍然很低(1mL/min)，所需分离分析时间很长！ 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，但柱塔板高度Hmin也相应增加了，或者说柱效下降了。而由速率理论知：色谱柱板高H几乎正比于固定相平均粒径dp的平方，因此提高柱效最有效的方法，是减小固定相颗粒物的粒径，目前所使用的固定相平均粒径多在3-10 ?m 。 4.1.1 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较 高压: 一般可达到150?350×105Pa。 高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时；一般流动相流速为1?10 mL/min。 高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。 一般 n 30,000 plates/m。 高灵敏度:１～１０μL，足以完成全分析。 4.1.2 HPLC与GC的比较 §4.2 流程及主要部件 Components Solvent Reservoir and Degassing System Pumps Sample Injection System Columns Temperature Control Detectors 4.2.2 主要部件 (1) 高压输液装置 1）贮液器Solvent Reservoir：1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器(Ni合金)，其孔径约2 ?m，可防止颗粒物进入泵内。 注：贮液罐放置位置要高于泵体，以保持一定的输液静压。 密闭。 2）脱气Degassing System：溶剂通过脱气器中的脱气膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去（气泡会影响检测）。 ①吹氦气脱气法 　 (如：右图)②加热回流法 　③抽真空脱气法 　④超声波脱气法 　 以上方法均为离线脱气，随溶剂存放时间延长又会有空气进入溶剂。。 ⑤在线真空脱气法 将真空脱气装置串接到贮液罐与高压泵之间，实现溶剂在进入高压泵之前的连续脱气。脱气效果最优。 为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作： ①防止任何固体微粒进入泵体，可采用MILLIPOIPORE滤膜（0.2或0.45）等滤器过滤。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。 ②流动相不应含有任何腐性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在柱内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。 ③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完。 ④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。 ⑤流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性如果有大量气泡，泵就无法正常工作。 4）梯度淋洗装置 gradient elution 内梯度: 利用两台高压输液泵，将 两种不同极性的溶剂按一定的 比例送入梯度混合室，混合后 进入色谱柱。 外梯度: 一台高压泵, 通过比例调 节阀，将两种或多种不同极性 的溶剂按一定的比例抽入高压 泵中混合。 梯度洗脱的特点： 优点： 单位时间的分离能力增加 检测灵敏度提高 缺点： 仪器设备要求高 不适合某些检测方式 柱需再生 定量分析的重复性较低 梯度洗脱的可变参数： A液和B液的成分和化学特性 梯度的陡度和变化形状 纵坐标:B% 横坐标:时间 (2) 进样装置 隔膜进样。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内，样品直接送到柱头填充床的中心，死体积几乎等于零，进样重复性只能达到1～2％； 停流进样：打开流动相泄流阀，使柱前压力下降，进样后，关闭阀门使流动相压力恢复。 可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”；另一缺点是保留时间不准。 高压定量进样阀： 由圆形密封垫子（转子）和固定底座（定子）组成。由于阀接头和连接管死体积存在，柱效率低于隔膜进样（约下降5～10％左右），但耐高压（35～40MPa），进样量准确，重复性好（0.5％），操作方便。 自动进样器 用于大量样品的常规分析