没食子酸及其氧化产物对大鼠肝微粒体CYP3A的.doc

没食子酸及其氧化产物对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制 石 亮，张远冬，王二豪，惠俊敏，郭延垒，于 超 （400016重庆，重庆医科大学生命科学研究院） [摘要] 目的 体外研究没食子酸对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制效应及机制，探讨中西药间发生药物相互作用的可能。 方法 将不同浓度没食子酸与鼠肝微粒体及探针底物在37 ℃下孵育，用高效液相色谱-紫外法测定探针底物的代谢产物生成率，计算IC50值。在NADPH存在或不存在时，将没食子酸与鼠肝微粒体在37 ℃下分别预孵育0、15、30 min后继续孵育15 min，测定探针底物的代谢产物生成率，观察没食子酸对CYP3A抑制的时间依赖性。在无NADPH存在时，将不同浓度没食子酸与鼠肝微粒体在37 ℃下分别预孵育0、30min后继续孵育15 min，测定探针底物的代谢产物生成率，计算出两实验组IC50平移值(IC50 shift)。观察2.5h内没食子酸在紫外-可见光光谱下的变化。在无NADPH存在时，将抗氧剂与没食子酸及鼠肝微粒体在37 ℃下共同预孵育，观察抗氧剂谷胱甘肽和维生素C的加入对没食子酸抑制强度的影响。结果 没食子酸对CYP3A表现出浓度依赖性抑制(P0.05)，IC50为130.2 μg/mL。预孵育无NADPH存在时，没食子酸对CYP3A表现出时间依赖性抑制(P0.05)，且抑制强度远大于NADPH存在的实验组。在无NADPH存在时，没食子酸与鼠肝微粒体在37 ℃下分别预孵育0 min和30 min，两实验组间的IC50平移值达11.9。紫外-可见光全波长扫描观察显示，没食子酸在孵育过程中生成了2种反应产物。抗氧剂的加入能显著降低没食子酸对CYP3A的抑制能力(P0.05)。结论 没食子酸对CYP3A的活性表现出较强的不可逆性抑制， [关键词] 没食子酸；肝微粒；CYP3A；大鼠 [中图法分类号] [文献标志码] A [基金项目] 国家自然科学基金；高等学校博士学科点专项科研基金(20125503110008) [通信作者] 于 超，电话:（023 E-mail:yuchaom@163.com [优先出版] /kcms/detail/51.1095.R1226.002.html（2013-09-23） Inhibitory effect of gallic acid and its oxidation products on CYP3A in rat liver microsomes Shi Liang, Zhang Yuandong, Wang Erhao, Hui Junmin, Guo Yanlei, Yu Chao (Institute of Life Sciences, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China) [Abstract] Objective To investigate the inhibitory effect and mechanism?of gallic acid on CYP3A in rat liver microsomes in vitro. Methods Rat liver microsomes were incubated with different concentrations of gallic acid and probe substrates at 37℃. The formation of metabolites was detected by high performance liquid chromatography-UV and IC50 was calculated according to the formation rates of metabolites at various concentrations of gallic acid. Gallic acid was used to pre-incubate with rat liver microsomes in the presence or absence of NADPH at 37℃ for 0, 15 and 30 min separately. Probe substrate metabolite generation rate was measured to observe the time-dependent inhibition of CYP3A after 15 min incubation. D