转化子的筛选—菌落.ppt

免疫化学检测法 对所有的转化细胞进行培养，把一张硝酸纤维膜均匀地压在含有许多单个菌落的培养皿表面，用碱处理膜，使细胞裂解，表达产物蛋白质将释放出来，加入带放射性的某一特定基因编码的蛋白质的抗体可与表达产物蛋白质结合，自显影即可检出。 思考题 用蓝白斑筛选，以获得阳性克隆。那它和直接利用AMP抗性，而不用蓝白斑筛选，有什么区别吗？蓝白斑筛选有什么作用吗？  目的基因（β珠蛋白基因）片段克隆以及阳性克隆的筛选 ——菌落PCR 邱逸敏 基因工程与发酵工程教研室 DNA克隆的过程 获得目的DNA片断 (提取质粒DNA、PCR、酶切） 载体DNA与目的基因连接 转化受体细胞 筛选转化子 表达目的基因 连接反应后，可形成多种类型的DNA分子1.不带外源DNA的载体自连分子2.外源DNA彼此相连的多聚DNA分子3.载体与外源DNA相连的分子 通过筛选鉴定： 1.有没有外源DNA 2.外源DNA的连接方式是否正确 重组子筛选方法 遗传检测法 物理检测法 菌落原位杂交法 免疫化学检测法 测序 菌落PCR 遗传检测法 （1）抗药性记号插入失活