植物的器官培养.ppt

第六章 植物的器官培养 【学习目的要求】 1．一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择。 2．掌握茎尖培养的种类和操作步骤。 3．掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整。 4．掌握离体叶片的培养步骤。 5．一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。 6.掌握如何防止培养过程中外植体的褐化和玻璃化。 7.掌握植物器官组织培养常见问题的原因及对策 【主要内容】 第一节　营养器官培养 一、离体根培养 二、茎尖培养 三、茎段培养 四、离体叶培养 第二节　生殖器官培养 一、花器官和种子培养 二、胚胎培 三、胚珠培养 第三节 植物器官组织培养常见问题及对策 第一节　营养器官培养 一、离体根培养 ㈠ 离体根培养特点：因为根系生长快，代谢强，变异小，加上无菌，不受微生物干扰，可根据研究需要，改变培养的成分来研究其营养吸收、生长和代谢的变化。 ㈡ 应用：研究根系生理和代谢变化；也可由根细胞再生成植株，不仅证明根细胞的全能性，也产生了无性繁殖系，用于生产实践。 一、离体根培养 ㈢ 培养方法： 1．培养基 用无机离子浓度低的White培养基，也可用MS、B5等，但浓度为2/3或1/2。White培养基配方为：硝酸钾80，硫酸镁720，硫酸锰7，硫酸铜0.03，碘化钾0.75，Vpp0.5,VB6 0.1,VB1 0.1,甘氨酸3(mg/L) 一、离体根培养 2．无性系的建立和培养、应用 1)将种子进行表面消毒，在无菌条件下用湿布培养萌发，至根伸长1.0cm以上。 2)从根尖一端切取长1.2cm的尖端，接种于培养基中。3)培养物生长甚快，几天后发育出侧根。待侧根生长约一周后，即切取侧根的根尖进行接种培养，如此反复，得到离体根的无性系。 4)这种根可用来进行根系生理生化和代谢方面的实验研究。如营养选择吸收、根尖伸长生长、生长素对伸长的影响等 5)培养条件为暗光、25～27℃。 3．植株再生培养 第一步诱导形成愈伤组织。第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、再分化成小植株。 二、 茎尖培养 ㈠ 概念：是切取茎尖部分或茎尖分生组织部分，进行培养的过程。这是组织培养中用得较多的外植体。因为茎尖分生区是三个分区的主要部分。 ㈡ 茎尖培养可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。 1.微茎尖：指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。 2.普通茎尖：指取几mm到几十mm长的顶芽尖及侧芽尖。这里主要介绍后者 ㈢ 特点：技术简单，操作方便，易成活和分化，成苗时间短。 ㈣ 步骤如下： 1．取材：挑选洁净、无污染，生长不久的茎，从植物的茎、藤或匍匐枝上切取2cm以上的顶梢。木本植物可事先对茎尖喷几次灭菌药剂。用于普通茎尖培养。 2．消毒 将采到的茎尖切成0.5～1.0cm长，并将大叶除去，休眠芽预先剥除鳞片。将茎尖置于流水冲洗干净，再在95%的酒精中处理30秒，然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5～８分钟，最后用无菌水冲洗数次，沥干后准备接种。 3．接种 为了减少污染，在接种前再剥掉一些幼叶，使茎尖为0.5cm大小左右。用作快速繁殖。 注意：一要防褐化。接种时，不用锈刀，动作敏捷，随切随接，用1～5%VC液浸泡处理。二要防干燥 4．培养 （1）培养基：采用MS培养基或略加修改，或补加其它物质。也可用其它培养基如White,Heller等。 培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA,NAA等，但是浓度不能太高，一般用0.1mg/L左右，若高易产生畸形芽或形成愈伤组织。 （2）培养问题处理： 茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。 I 生长太慢：接种后茎尖不增大，只是茎尖逐渐变绿，出现绿色小点，细胞逐渐老化而进入休眠状态，或者逐渐变褐死亡。引起原因的是生长素浓度太低，或是温度过低或过高。 （2）培养问题处理： II 生长太快型：是接种后茎尖迅速增大，在茎尖基部产生愈伤组织，并迅速增殖，而茎尖不伸长，久之茎尖也形成愈伤组织，从而丧失发育成苗的能力。引起原因一是生长素浓度过高，引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。二是光照太弱或温度太高。 （2）培养问题处理： III 生长正常型是接种后茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖颜色逐渐变绿，并逐渐伸长，叶原基发育成可见的小叶，进而形成小苗。 （3）培养条件： 培养时每天光照可长一些，最长达16h/d，照度1500-3000Lx，温度25±2℃。并且根据不同植物种类，或者随培养过程的不同，给予适当的昼夜温差等处理。 注意：防培养基干燥，由于茎尖培养时间较长，通过定期转移、严加封口等。一般茎尖培养在４０天左右可直接长成新梢。 （4）继代培养 用茎段切割法。 继代培养可用MS0培