DNA提取步骤---2ml 离心管提取.docxVIP

附录3 植物基因组DNA提取过程 2ml离心管提取 取新鲜叶片采用CTAB法，按Murry等{Murray, 1980 #9}的方法，略加改进，具体操作过程如下： 2.0 ml离心管加入叶片（直径为1-1.2cm的圆形叶片，大约就是大拇指指甲盖大小的叶片）； 液氮加入到2ml 离心管中，待液氮完全挥发完后，充分研磨叶片成粉末，加入1 ml CTAB 缓冲液，充分混匀； 65 ℃水浴1小时，期间摇匀3次； 取出，冷却至20 ℃以下； 加入 900ul 的氯仿，上下混匀1-2 min，保证样品与氯仿充分混合； 12,000 rpm离心10 分钟； 小心吸取上清夜至新的2.0ml离心管中 （估计上清大约900 ul），然后加入等体积的900ul的异丙醇，轻轻上下颠倒混匀，此时会看到絮状沉淀； -20℃冰箱静止30-60分钟以上，或者过夜也可 （不能放入-80冰箱，温度太低了 或许会结冰）； 12,000 rpm离心15分钟，弃上清夜； 加入400ul-600ul的75%酒精洗涤沉淀， 12,000 rpm离心10分钟，弃上清液； 风干DNA，让酒精挥发干净（4小时以上或过夜）；如果需要邮寄DNA，到这一步就可以了，盖好管子，并用封口膜缠好管口邮寄就好 加入100 μL左右的纯水（含终浓度为1%RNase）溶解DNA； 放入37 ℃环境中，约60min消化RNA； 去2 μL DNA进行检测。 注意： 操作过程的每一个管子 都要管盖子和管身都要写好单株编号，以免有机试剂将单株编号抹去