DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.docVIP

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// 3 - 杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// 1 - ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 目录号：DN26 目录编号 包装单位 DN2601 50ml DN2602 100ml 产品介绍： DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂，简单高效，结果可靠，可快速提取基因组DNA，适用于多种大量或少量样品。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA，经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30 分钟，DNA 回收率可达70-100％，得到的DNA 不需再纯化，可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。 产品储存： 室温保存至少一年。 注意事项： DNAzol 有毒害性，应避免直接接触皮肤和眼睛。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 裂解，匀浆 组织： 25-50mg 组织加1ml DNAzol ，使用匀浆仪处理5-10 次。少量（5-10mg）柔软组织，如脾或脑组织，可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打混匀，室温放置5-10 分钟。 细胞：单层培养的细胞应直接裂解，倒出培养基，加入DNAzol 用取样器吹打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。 细胞沉淀或悬浮液：每1-3×107 细胞（体积小于0.1ml）加1ml DNAzol，反复吹打混匀。 以上均要使用大口径枪头吹打，以免过度剪切断基因组。 离心 4 -25℃，10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。 此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品，如肝、肌肉和大部分植物组织等，或要提取不含RNA 的DNA 时，可加此步骤。其他样品可省略此步。 沉淀 每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇，颠倒离心管5-8 次，混匀样品至出现DNA沉淀，室温放置1-3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀，让沉淀自然沉降到管底，尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上，仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug)，无法缠绕到枪头上，可在4 -25℃，4000g 离心1-2分钟沉淀DNA，弃上清。 漂洗 用0.8-1ml 75％乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时，将DNA 悬浮在乙醇中，颠倒离心管3-6 次，然后静置0.5-1 分钟使DNA 沉降到管底，尽可能吸弃上清。 如果需要，可在4 -25℃，1000g 离心1-2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时，如需去除其他内含物，第一次漂洗可用70％DNAzol 和30％乙醇的溶液代替75％乙醇。 溶解 用枪吸去残余的乙醇，晾干几秒钟后立刻用8mM NaOH溶解DNA（DNA暴露于空气几秒钟都会大大加大溶解难度，因此乙醇晾后立刻溶解）。可将沉淀吸到大口径枪头中缓慢通过数次来帮助溶解。TE缓冲液和水溶解效果不完全，因此建议用碱溶液，可更快速且彻底的溶解。通常，从107 细胞或10-20mg 动物组织中提取的DNA 可用0.2-0.3ml 8mM NaOH溶解，使DNA浓度约为0.2-0.3ug/ul。 如果从植物、肝脏、肌肉等富含糖原的材料提取DNA，最后可能会有一些残留物（多糖）无法溶解，可以用12,000Xg离心10分钟去除。 8mM NaOH容易被空气氧化，应该用不超过6个月的2-4mol的NaOH储存液，每月配制一次。 结果检测 以8mM NaOH溶液溶解的DNA（用DNAzol提取的DNA在Tris缓冲液中溶解效果不好）在紫外分光光度计检测A260/A280，A260 为1 相当于50ug 双链DNA/ml。得到的A260/A280应为1.6-1.9，片段大小为20-100kb。得到的DNA 片段大小取决于提取过程中机械外力对DNA 的破坏程度.