番茄叶片组织总DNA的抽提.docVIP

实验一 番茄叶片组织总DNA的抽提（每组抽提一个样品） 若干2% CTAB抽提缓冲液于65℃水浴中预热 ↓ 取供试植物幼叶0.2克，置于研钵中加液氮研磨成粉状（1） ↓ 迅速加入600μl 预热的抽提缓冲液提前（加入1% 巯基乙醇），稍作研磨混匀（2） ↓ 将研磨液转入2.0 m l离心管中，放于65℃水浴30~45分钟，期间不时摇匀（3） ↓ 取出，加入300μl Tris-饱和酚（取下层）与300μl氯仿/异戊醇(24：1)，混匀， 剧烈振荡30秒（4） ↓ 放入离心机，12,000 rpm，离心10分钟 (室温) （5） ↓ 取上清液置于新的离心管中，记下所取的体积数（6） ↓ 加入等体积氯仿/异戊醇(24：1)，温和地混匀， 放入离心机，12,000 rpm，离心10分钟 (室温) （7） ↓ 取上清液置于新的离心管中，记下所取的体积数（8） ↓ 按比例加入1/10体积的3 mol/L NaAc (pH 5.2) 和2倍体积冷冻的无水乙醇， 混匀，置-20℃冰箱放置20～30分钟（9） ↓ 取出样品，放入离心机（4℃），12,000 rpm，离心10分钟，弃尽上清液（10） 　　↓ 沉淀分别用冷冻的70%乙醇和无水乙醇各洗一次，于室温下风干5～10分钟（11） 　　↓ 将沉淀溶于200μl TE溶液（加入RNase A）中 (用手指轻弹离心管使沉淀充分悬浮) （12） 　　↓ 此为DNA粗提取液，可进行PCR检测。本次实验只做到这一步，下面步骤为精提纯步骤 ↓ 重复第7到12步的实验步骤，所得DNA溶解于100μl双蒸水或TE溶液中 （DNA的精练过程） ↓ 用核酸蛋白仪测定DNA纯度，并用1%的琼脂糖凝胶电泳验证后，置于-20℃下保存备用 DNA浓度测定： 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯DNA 的OD260/OD280≈1.8-1.9，﹤1.8，表示DNA样品中污染有苯酚和蛋白质，﹥1.9表示DNA样品中污染有RNA。