中国实验动物学会团体标准.PDFVIP

ICS 65.020.30 B 44 中国实验动物学会 团体标准 T/CALASx-201x 实验动物 鼠痘普通PCR和实时荧光PCR检测方法 Laboratory animals-MethodsofconventionalPCR andreal-timePCR forthe detection ofEctromeliavirus （征求意见稿） 201x-xx-xx 发布 201x-xx-xx 实施 中国实验动物学会 发布 T/CALASx-201x 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则编写。 本标准附录A 为资料性附录。 本标准由中国实验动物学会归口。 本标准由全国实验动物标准化技术委员会 （SAC/TC281）技术审查。 本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。 本标准主要起草单位：广东省实验动物监测所。 本标准主要起草人：xx，xx。 I T/CALASx-201x 实验动物 鼠痘普通PCR和实时荧光PCR检测方法 1. 范围 本标准规定了实验动物鼠痘病毒普通PCR 和实时荧光PCR 检测方法。 本标准适用于实验动物及其产品、细胞培养物、实验动物环境和动物源性生物制品中鼠 痘病毒的检测。 2. 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 3. 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 Ct 值 荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数 （cyclethreshold） DNA 脱氧核糖核酸 （deoxyribonucleic acid） Ect 鼠痘病毒 （Ectromeliavirus） PBS 磷酸盐缓冲液 （phosphatebuffered saline） PCR 聚合酶链式反应 （polymerase chainreaction） 实时荧光PCR 实时荧光聚合酶链式反应 （real-timePCR） 4. 检测方法原理 根据鼠痘病毒Genbank 中序列，针对鼠痘病毒核酸保守序列IFN-γ 受体基因设计特异 的引物和探针序列，分别通过PCR 和实时荧光PCR 对模板DNA 进行扩增，根据PCR 和实 时荧光PCR 检测结果判定该样品中是否含有病毒核酸成分。 PCR 的基本工作原理是以拟扩增的DNA 分子为模板，以一对分别与模板5末端和3 末端互补的寡核苷酸片段为引物 （primer），在耐热DNA 聚合酶的作用下，按照半保留复制 的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA 分子合成。重复这一过程，即可使目的DNA 片 段得以大量扩增。 实时荧光PCR 则设计合成一对特异性引物和一条特异性探针，探针两端分别标记一个 报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收； PCR 扩增时，Taq 酶的5→3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团 分离，淬灭作用消失，荧光信号产生并被检测仪器接受，随着PCR 反应的循环进行，PCR 1 T/CALASx-201x 产物与荧光信号的增长呈对应关系。因此，可以通过检测荧光信号对核酸模板进行