核转染技术转染大鼠胚胎干细胞的初步研究-中国细胞生物学学报.pdf

网络出版时间：2015-03-03 10:42 网络出版地址：/kcms/detail/31.2035.Q1042.001.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2015, 37(3): DOI: 10.11844/cj cb.2015.03.0353 核转染技术转染大鼠胚胎干细胞的初步研究 吴兆强 赵丽华 张曼玲 金 永 聂晓伟 侯道荣 杨 宁 陈 袁 李荣凤* (南京医科大学江苏省异种移植重点实验室, 南京2 10029) 摘要 大鼠胚胎干细胞(rat embryonic stem cells, rESCs)的基因转染研究仍处于探索阶段。 该文利用不同的核转染条件, 将红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)表达载体pEF 1alpha- DsRed-Express2导入大鼠胚胎干细胞中, 比较不同转染条件下大鼠胚胎干细胞的红荧光蛋白表达 效率和死亡率, 确定最佳核转染条件。在采用最佳核转染条件转染大鼠胚胎干细胞后, 利用碱性磷 酸酶染色、RT-PCR 、免疫荧光染色等方法, 比较核转染前后大鼠胚胎干细胞的干细胞特性, 探讨 核转染过程对大鼠胚胎干细胞的干细胞特性的影响。实验结果显示, 转染条件为A-13时, 可获得最 好的大鼠胚胎干细胞转染效率(39.63± 1.75)%。核转染后表达红色荧光蛋白的大鼠胚胎干细胞的碱 性磷酸酶染色结果仍为阳性。另外, PT-PCR和免疫荧光染色结果表明, 核转染前后大鼠胚胎干细 胞的干细胞多能性标志基因的表达情况未出现明显差异。研究表明, 核转染条件A-13可以在不改 变大鼠胚胎的干细胞干细胞特性的条件下有效地对其进行基因转染, 即核转染技术适用于大鼠胚 胎干细胞的基因转染。 关键词 大鼠胚胎干细胞; 红色荧光蛋白; 核转染; 干细胞多能性标志基因 Preliminary Study on Nucleofection of Rat Embryonic Stem Cells Wu Zhaoqiang, Zhao Lihua, Zhang Manling, Jin Yong, Nie Xiaowei, Hou Daorong, Yang Ning, Chen Yuan, Li Rongfeng* (Jiang Su Key Laboratory of Xenotransplantation, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China) Abstract The study of gene transduction on rat embryonic stem cells (rESCs) has been explored continually. In our study, in order to detect the optimized program for gene transduction, the reporter red fluorescent protein (RFP) gene was transfected into rESCs with different nucleofection programs. The proportion of cells with red fluorescent and the dead cells after transfection were compared among different programs. Then, the best program was selected