水中大肠杆菌群检测方法－滤膜法.doc

PAGE PAGE 4 室內空氣中細菌濃度檢測方法 NIEA E301.10C 一、方法概要 　　 本方法係用將一定體積容量之空氣樣本直接衝擊於適合細菌生長之培養基上。並於 30±1oC培養48±2小時生長後，計數培養基上細菌之菌落數，以計算一立方公尺空氣中之總細菌濃度。 二、適用範圍 　　 本方法適用於設有機械通風及空調系統的大樓或辦公、營業場所等室內環境空氣中細菌濃度之檢測。 三、干擾 （一）採樣器操作時流量變異可能影響微粒注入。 （二）空氣體積計算的誤差可能來自流量或採樣時間測量所產生。通常以流量控制設備用以減少空氣體積計算的誤差，此外亦可使用計時器將採樣時間測量的誤差減至最小。 （三）採樣器不可直接放置於空調進出口下方或正對空調進出口。 四、設備 （一）可攜式衝擊採樣器。 （二）培養箱：溫度能保持 30±1oC者。 （三）加熱板：可調溫度，並附磁石攪拌功能者。 （四）天平：能精稱至0.01 g者。 （五）菌落計數器：用於計算菌落數目。 （六）高壓滅菌釜：能以中心溫度 121oC（壓力約1 kg/cm2）滅菌 15 分鐘以上者。 （七）乾熱滅菌器（烘箱）：用於玻璃器皿等用具之滅菌。溫度能保持 160oC達2小時或 170oC達1小時以上者。 （八）培養皿：90×15或100×15 mm之滅菌玻璃培養皿或市售無菌塑膠培養皿，底面平滑無氣泡、刮傷或其他缺點者。 （九）三角錐瓶：一般使用250至2000 mL能耐高壓滅菌之硼矽玻璃製品。 （十）冰桶：溫度能保持在4oC者。 （十一）水浴槽：溫度能保持在約48±2oC者。 （十二）無菌操作檯。 （十三）流量校正器。 五、試劑 （一）培養基，選擇適合許多種類之細菌之廣效性之胰蛋白大豆瓊脂培養基（Tryptic Soy Agar），其每一公升培養基組成成分： 胰化蛋白腖（Tryptone） 15.0 g 大豆蛋白腖（Soytone）或 硫化蛋白腖（Thiopeptone或Thiotone） 5.0 g 氯化鈉（NaCl） 5.0 g 瓊脂（Agar） 15.0 g 將上述成分40 g溶於之1公升蒸餾水中pH＝7.3±0.2（在25oC），經 121oC滅菌15分鐘。置於約 50oC的水浴槽中，避免凝結，冷卻至45~50oC，分裝約15 mL之培養基至直徑 90×15或100×15 mm培養皿中，置於室溫下凝固。 （二）70%酒精﹕消毒擦拭用。 六、採樣與保存 （一）採樣點應避免在完全密閉且未設置機械通風及空調系統（或設有獨立機械通風及空調系統）的空間，如雜物間、電氣（機）房等非污染源頭之位置採樣。 進行大樓採樣規劃時，原則上應涵蓋高、中、低樓層。每樓層至少應採1點，採樣人員可視大樓內不同樓層之公眾使用密度，增加採樣點數。 執行辦公、營業場所採樣時，應充分考量該場所之不同營運特性。原則上，辦公場所可選擇2至4個不同時段，並平均分配在辦公時間內採樣；營業場所之採樣時段，應包括室內空氣品質最惡劣的情況（如人潮最多的時段）。採樣點之佈置應避開如電梯出入口、走道等人行干擾，或如吸煙區、打印室等其他污染物干擾的位置，並選擇受干擾影響最小之處採樣。 同一大樓或辦公、營業場所，可能有不同的個別通風及空調系統分區，採樣點應平均分佈於不同分區中。各分區的採樣點應距離其區隔（如牆壁）或角落最少50公分以上。採樣時，採樣口之位置應放置於地面約120至150公分之高度。 上述地點如發現有微生物生長痕跡，或曾經遭抱怨有不適感之處，皆應列為優先採樣地點。 採樣時應記錄採樣點環境温度及溼度。 採樣前、後培養基應保存於4oC的冰桶中。 七、步驟 （一）採樣前先行校正採樣器之流量。 （二）視採樣空間決定適當採樣點數。 （三）將培養基放置於採樣器內，設定抽取適當空氣體積，使得空氣中的微粒直接撞擊平面培養基中繁殖培養，視採得可計數之菌落數的時間或體積量為最佳量(約300個菌落以內)，採樣皆需進行二重複，採樣後於24小時內運送至實驗室並置於培養箱之培養。 更換未使用培養基之前，應先以70%酒精擦拭採樣器放置培養基之可能接觸部位後，再行放置未使用之培養基進行不同位置之採樣。 採樣後將培養皿置於30±1oC培養箱內培養48±2小時。即培養24小時後需注意菌落生長情形，以利紀錄數據。 計數各培養皿中所產生的菌落，並記錄之，菌落太多或雜菌菌落數太多造成判讀困難，則以「菌落太多無法計數」（Too Numerous To Count, TNTC）表示。 　 八、結果處理 將所計數之總菌落數，除以採樣時所抽取之總空氣體積後（需以前後流量之平均值求取總空氣體積），得到一立方公尺總空氣中細菌濃度。 二重覆的兩個培養皿檢測值相加計算其菌落數平均數，單位以CFU/m3（colony forming unit/cubic