通过增加痰液量和超声裂菌提高结核分枝杆菌荧光定量-检验医学.pdf

检验医学２０１４年３月第２９卷第３期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ３． ·２１５· 文章编号：１６７３８６４０（２０１４）０３０２１５０４　　　中图分类号：Ｑ５０３　　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１４．０３．００４ 通过增加痰液量和超声裂菌提高结核 分枝杆菌荧光定量ＰＣＲ检出率 张　军，　王晓飞，　王瑞东，　韩　敏，　景玲杰，　陈　晋 （同济大学附属上海市肺科医院检验科，上海２００４３３） 　　摘要：目的　通过增加痰液量和超声破碎法提取痰液中的结核菌ＤＮＡ，提高结核分枝杆菌实时荧光定量聚 合酶链反应（ＰＣＲ）的检出率。方法　选择２０６例肺结核患者，以１０３例非结核患者作为对照组；肺结核患者同时 进行结核菌涂片，并在美国ＢＤ公司的ＭＡＧＩＴ９６０仪器上进行液体快速培养结核菌。另收集至少５ｍＬ的痰液， 加入２～３倍体积的４％氢氧化钠液化后，取１ｍＬ按照采用常规方法抽提痰液中的结核菌ＤＮＡ，剩余部分采用 改进的超声破碎法提取结核菌ＤＮＡ；两者同时进行实时荧光定量ＰＣＲ检测。结果　采用增量超声法，对于涂片 阳性、培养阳性的结核患者，阳性检出率由８７．５％（可信区间为８１．４％～９３．６％）提升至９５．５％ （可信区间为 ９１．７％～９９．４％）（Ｐ＜０．０５）。对于涂片阴性、培养阳性的患者，阳性检出率由５７．４％（可信区间为４７．５％～ ６７．４％）提高至８３％（可信区间为７５．４％～９０．６％）（Ｐ＜０．０１）。增量超声法比常规方法，定量值平均提高１４倍 以上。结论　通过增加痰液量和超声破碎法提取痰液中的结核菌ＤＮＡ，可提高实时荧光定量ＰＣＲ结核分枝杆 菌的检出率，值得进一步推广应用。 关键词：结核分枝杆菌；实时荧光定量聚合酶链反应；超声；痰液 　　ＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｉｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＰＣＲｂｙ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｓｐｕｔｕｍｖｏｌｕｍｅａｎｄｍｏｄｉｆｙｉｎｇｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅ　ＺＨＡＮＧＪｕｎ，ＷＡＮＧＸｉａｏｆｅｉ，ＷＡＮＧ Ｒｕｉｄｏｎｇ，ＨＡＮＭｉｎ，ＪＩＮＧＬｉｎｇｊｉｅ，ＣＨＥＮＪｉｎ．　（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＰｕｌｍｏｎａｒｙＨｏｓｐｉｔａｌ， ＴｏｎｇｊｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＭＴＢ）ｉｎｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｂｙｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｓｐｕｔｕｍｖｏｌｕｍｅａｎｄｍｏｄｉｆｙｉｎｇｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＭＴＢ ＤＮＡ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｐｕｔｕｍｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ２０６ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄ１０３ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｐａｔｉｅｎｔｓａｓｃｏｎｔｒｏｌｓｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．ＲｏｕｔｉｎｅｓｐｕｔｕｍＭＴＢｓｍｅａｒａｎｄｌｉｑｕｉｄｃｕｌｔｕｒｅｏｆＭＴＢｂｙＡｍｅｒｉｃａｎＢＤＭＡＧＩＴ９６０ｓｙｓｔｅｍｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ａｔ ｌｅａｓｔ５ｍＬｓｐｕｔｕｍｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｅａｃｈｐａｔｉｅｎｔ，ａｎｄ２３ｆｏｌｄｖｏｌｕｍｅｏｆ４％ ＮａＯＨｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓａｄｄｅｄｔｏｔｈｅｓｐｕｔｕｍ． Ａｆｔｅｒｌｉｑｕｅｆａｃｔｉｏｎ，１ｍＬｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｒｏｕｔｉｎｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ａｎｄｔｈｅｒｅｍａｉｎｉｎｇｐａｒｔｗａｓｕｓｅｄｆｏｒ ｔｈｅｍｏｄｉｆｉｅｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅ．ＢｏｔｈｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｅｄＤＮＡｗｅｒ