基因工程毕设答辩PPT模板.ppt

蛋白质纯化 诱导条件的确定 蛋白质纯化（见图3-7） ◆根据上图实验结论，应该从上清中纯化蛋白 问答时间 〇___________________________________________ 〇___________________________________________ 〇___________________________________________ 〇___________________________________________ 〇___________________________________________ 〇___________________________________________ 对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因的克隆及纯化 07100 食品专业 指导老师： 2011.5.08 一、研究背景 二、研究意义与目的 三、实验设备 四、毕业设计概述与成果展示 五、问答时间 六、致谢 研究背景 世界对虾养殖业兴起于20世纪70年代，并在80年代得到飞速发展 我国沿海地区经济的重要产业之一就是中国对虾(Penaeus chinensis) 的养殖, 并且养殖产量在 1993 年以前连续几年位居世界前列 对虾养殖业发展快速，伴随养殖环境恶化、种质退化和种质资源破坏、非传染性疾病以及传染性疾病等一系列问题逐步滋增，严重制约着对虾养殖业的进一步发展。 NEXT 研究背景 对虾病毒病，已成为阻碍对虾养殖业发展的主要因素 白斑综合症病毒white spots syndrome virus 简称 WSSV，是1993年来引发我国大面积暴发对虾病毒性疾病的主要病因 ； 中美学者徐洵等和荷兰学者van Hulten 等先后完成了 WSSV 的基因组全序列的测定 ； 近年来研究的热点问题就是对虾免疫学，目前对虾的免疫研究主要集中在抗菌方面，而有关抗病毒作用的研究较少，而病害控制除了病原以外，宿主本身的抗病能力也是一个重要因素。 BACK 研究意义与目的 有研究以证明囊膜蛋白Vp28与对虾白斑综合征系统感染有关。对探索WSSV病毒膜蛋白在感染过程中的作用，应该从病毒和宿主两方面入手，为建立有效的防治方法提供科学依据。 本实验着重研究与对虾WSSV病毒的感染密切相关的主要囊膜蛋白Vp28，对此基因进行克隆与表达，为探讨WSSV病毒感染的分子机制提供良好的基础材料。 BACK 毕业设计概述与成果展示 毕业设计分三大部分： ◆基因重组 ◆基因表达 ◆蛋白质纯化 BACK 基因重组 PCR扩增Vp28基因(图3-1) 将含有pGEX-4T-2的大肠杆菌接种 琼脂粉凝胶电泳 到5μl LB培养液中，37℃中摇培过夜 割取目的条带 按试剂盒提取质粒，最后溶于30μlddH2O中 胶回收，溶于30μlddH2O中 取3μl电泳，确定质粒浓度 取3μl电泳，确定目的基因浓度 取适量质粒双酶切（同酶） 取适量目的基因质粒双酶切 酶切后的质粒电泳 酶切产物琼脂电泳 割取目的条带 割取目的条带 胶回收，最后溶于25 μlddH2O 胶回收，溶于25 μlddH2O中 取3 μl电泳，确定经酶切质粒浓度 取3μl电泳，确定经酶切目的基因浓度 根据经酶切基因浓度：经酶切质粒浓度=（5~10）：1比例连接（16 ℃过夜） 转化涂布于平板，37 ℃过夜，次日(图3-2)筛选阳性菌落，进行菌落PCR BACK 基因表达 菌落PCR 筛选阳性菌株，阴性菌株排除 挑取2~3个阳性菌株，37℃摇床过夜培养 取1.5ml菌液提取质粒，溶于30μlddH2O中 取15μl做双酶切鉴定，如图可确认为阳性菌 取