代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌合成及分泌途径生产L-缬氨酸.PDFVIP

1606 生 物 工 程 学 报 张海灵 等/代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌合成及分泌途径生产L-缬氨酸 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Oct. 25, 2018, 34(10): 1606−1619 DOI: 10.13345/j.cjb.180112 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·工业生物技术· L- 1,2 1,2 1,2 张海灵 ，李颜颜 ，王小元 1 江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122 2 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122 张海灵, 李颜颜, 王小元. 代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌合成及分泌途径生产 L-缬氨酸. 生物工程学报, 2018, 34(10): 1606–1619. Zhang HL, Li YY, Wang XY. Metabolic engineering of L-valine synthesis and secretory pathways in Corynebacterium glutamicum for higher production. Chin J Biotech, 2018, 34(10): 1606–1619. 摘 要 : 谷氨酸棒状杆菌是目前微生物发酵生产 L- 缬氨酸的主要工业菌株。文中首先在谷氨酸棒状杆菌 VWB-1 中敲除了alaT ( 丙氨酸氨基转移酶) ，获得突变菌株VWB-2 ，作为出发菌株。进而对L- 缬氨酸合成途径 关键酶—— 乙酰羟酸合酶 (ilvBN) 的调节亚基进行定点突变 (ilvBN1M13) ，解除L-缬氨酸对该酶的反馈抑制。然后 辅助过量表达L-缬氨酸合成途径关键基因ilvBN1M13 、乙酰羟酸异构酶 (ilvC) 、二羟酸脱水酶 (ilvD) 、支链氨基酸 氨基转移酶 (ilvE) ，加强通往L-缬氨酸的碳代谢流，提高菌株的 L-缬氨酸水平。最后，基于过量表达 L-缬氨酸 转运蛋白编码基因 brnFE 及其调控蛋白编码基因 lrp1 ，提高细胞的 L- 缬氨酸转运能力。最终获得工程菌株 VWB-2/pEC-XK99E-ilvBN M13 CE-lrp -brnFE 在5 L 发酵罐中的L-缬氨酸产量达到461.4 mmol/L ，糖酸转化率达到 1 1 0.312 g/g 葡萄糖。 : L-缬氨酸，代谢工程，发酵，谷氨酸棒状杆菌 Metabolic engineering of L-valine synthesis and secretory pathways in Corynebacterium glutamicum for higher production Hailing Zhang1,2, Yanyan Li1,2, and Xiaoyuan Wang1,2 1 State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China 2 School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China Abstract: Corynebacterium g