杂交与斑点杂交条件.pptVIP

第17讲;温故知新;一、Northern杂交的由来 二、Northern杂交的用途 三、Northern杂交的基本流程 四、Northern杂交的优点和缺点 五、Northern杂交、Southern杂交和Western杂交的区别 六、斑点印迹杂交的原理 七、斑点印迹杂交的基本流程 八、课堂小结 九、作业 ; Northern杂交由斯坦福大学的George Stark教授于1975年发明。其原理是在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 之所以命名为Northern杂交是因为其原理与Edwin Mellor Southern教授发明的southern杂交原理相似，实验过程也相似，所以取了一个类似的名字叫Northern杂交。 ;二、Northern杂交的用途;三、Northern杂交的基本流程;三、Northern杂交的基本流程;1、RNA的提取 一个标准的印迹程序，第一步是提取样本的总RNA，在通过挂有oligo(dT)的色谱柱通过亲和层析分离纯化总RNA中的ｍＲＮＡ。然后通过甲醛变性胶将ｍＲＮＡ进一步按大小分离开。并通过溴化乙啶（ＥＢ）染色在转印前来检查ＲＮＡ的质量。 也可以使用含有尿素的的聚丙烯酰胺胶在分离