饮用水氯化消毒副产物及其遗传毒性.pptVIP

染色体畸变： ① 染色体结构畸变?（structural chromosome aberration） 由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失，或引起各种重排，从而出现的染色体结构异常。 ② 染色体数目的异常 指染色体数目发生改变，又称染色体数目畸变或基因组突变（genomic mutation） 通常将引起染色体结构畸变的物质称为断裂剂，将引起染色体数目异常的物质称为非整倍体诱变剂 基因突变和染色体结构畸变是以DNA为 靶的损伤 染色体数目异常是不以DNA为靶的损伤 （三）检测化学物遗传毒性的方法 直接测试某种遗传学终点（基因突变、染色体畸变、非整倍体），以确定受试物是否有遗传毒性。 测定在遗传学终点前的通道上发生的某一事件（如DNA损伤、DNA修复、姐妹染色单体交换等）来预测化学物是否具有损伤DNA的潜力。 常用方法： 1．基因突变试验： 正向和回复突变试验： 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames Test） 哺乳动物细胞正向突变试验（hprt基因正向突变试验） 2．染色体畸变试验： 体内和体外哺乳动物细胞微核试验 体内和体外哺乳动物细胞染色体分析 3．DNA损伤试验： 哺乳动物细胞姐妹染色单体互换（sister chromatid exchange，SCE）试验 单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis，SCGE，慧星试验，comet assay） 五、饮水氯化副产物和氯化饮水提取物的遗传毒性检测 （一）氯化饮水非挥发性有机提取物样品的制备 （二）饮水氯化副产物和氯化饮水提取物的遗传 毒性常用的检测方法 （三）结果评价 （一）氯化饮水非挥发性有机提取物样品的制备 水样采集，水样酸化，XAD2树脂吸附，丙酮洗脱，洗脱液浓缩至干燥，溶解于DMSO中，-20℃保存备用。 （二）饮水氯化副产物和氯化饮水提取物的遗传毒性常用的检测方法 1. Ames 试验（鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验）：是常用的经典方法 正向突变 野生型 突变型 回复突变 野生型：没有发生突变的有机体的正常性状。 正向突变：改变了野生型性状的突变。 回复突变：突变体所失去的野生型性状通过第二次突变 而恢复。 2. 微核试验 微核是染色体或染色单体的无着丝点断片，一切进行分裂的细胞，在染色体断裂剂的作用下，均能产生微核。 （1）体内微核试验 小鼠骨髓嗜多染红细胞 （2）体外微核试验 人淋巴细胞 人肝肿瘤细胞（双核微核试验） 3.慧星试验（SCGE） 一种快速敏感的用于检测单个细胞DNA断裂和碱性不稳定损伤的技术。 广泛地运用于遗传毒理学、辐射生物学、肿瘤学、病理学以及环境与职业人群的生物检测。 该法具有灵敏、简便、快速、适用于体内、体外试验等优点，是检测遗传损伤的一种有效方法。 SCGE 的检测原理 当外来化合物导致DNA断裂时，经过实验中细胞原位裂解、 DNA 解链等过程后，电泳时，损伤的 DNA 从核中溢出，朝阳极方向泳动，产生一个尾状带，未损伤的 DNA 部分保持球形，二者共同形成“慧星”，慧星尾的长度和慧星尾中DNA的含量与DNA断裂成正比，以此可以定量分析单个细胞DNA断裂程度。 SCGE的体内、体外实验 体内试验： 动物染毒，取脏器制备成单细胞，制片，电泳， 观察DNA损伤。 体外试验： 使用原代细胞或建立的细胞株，染毒，细胞消化 后制备成单细胞，制片，电泳，观察DNA损伤。 SCGE测试步骤（pH＞ 13） 组织细胞 单细胞悬液 微凝胶片 DNA解旋（pH＞13） 细胞裂解? 电泳 （25V, 300mA, pH＞13）  中和，染色 图象分析 慧星分析 ◆荧光显微镜+测微尺 测尾长 ◆荧光显微镜CCD成相分析系统 （IAS, Optilas comet system?） Oliver 尾相（Oliver Tail Moment） 尾长（Tail Length） 头或尾DNA强度（head or tail intensity of DNA） （三）结果评价 1. 阳性对照和阴性对照 阳性对照： 已知的遗传毒物（诱变剂），包括需 活化和不需活化两种。 阴性对照： 溶剂对照(常用DMSO) 空白对照 盲法观察： 免除观察人员对观察值的主观影响。 2．染毒浓度和时间