第七章发酵过程控制12.pptVIP

第七章 发酵过程的代谢控制 第一节 发酵过程中的代谢变化 第二节 发酵过程工艺控制的目的、研究的方法和层次 第三节 发酵过程的中间分析 第一节 发酵过程中的代谢变化 初级代谢的代谢变化 次级代谢的代谢变化 初级代谢的代谢变化 众所周知，初级代谢是生物细胞在生命活动过程中所进行的代谢活动，其产物即为初级代谢产物。 发酵中的菌体、基质和产物三者变化的基本过程是：菌体进入发酵罐后就开始生长、繁殖，直达一定的菌体浓度。 其生长过程仍显示适应(停滞)期、对数生长期、静止(稳定)期和衰亡期等生长史的特征。 但在发酵过程中，即使同一菌种，由于菌体的生理状态与培养条件的不同，各时期时间长短也不尽相同。如适应期的长短就随培养条件而有所不同，并与接种菌的生理状态有关。对数生长期的菌种移植到与原培养基组成完全相同的新培养基中，就不会出现适应期，仍以对数生长期的方式继续繁殖下去。 初级代谢的代谢变化 另外，用静止期以后的菌体接种，即使接种的菌体全部能够生长，也要出现适应期。 因此，工业发酵中往往要接入处于对数生长期(特别是中期)的菌体，以尽量缩短适应期。 为了获得代谢产物，菌体尚未达到衰退期即行放罐处理。 由于菌体生长繁殖和产物的形成，基质(如葡萄糖)浓度的变化一般是随发酵时间的延长而不断下降， 溶解氧浓度也随发酵过程变化而发生变化。 初级代谢产物由于没有明显的产物形成期，所以它是随菌体生长在不断地进行的，有的与菌体生长成平行关系，如乳酸、醋酸、氨基酸和核酸等。 初级代谢的代谢变化 上图表示初级代谢产物谷氨酸发酵过程的代谢变化。变化的根本原因在于菌体的代谢活动引起环境的变化，而环境的变化又反过来影响菌体的代谢。 在发酵初期种子刚接入发酵罐中，菌体处于适应期，以适应新的环境。细胞进行呼吸作用，利用贮存物质合成大分子物质和所需的能量，菌体个体长大，但没有分裂，此时糖等基质基本不消耗或很少消耗，pH值稍有上升是尿素被分解放出氨所致。 初级代谢的代谢变化 菌体经过适应期之后就开始繁殖，并很快进入对数生长期，代谢逐渐旺盛，菌体大量繁殖，个体生长和群体繁殖循环交替进行，培养物的混浊度(以光密度表示)与菌体增殖情况基本一致，OD(光密度)直线增长，菌体形态与二级种子相同。 耗糖速度加快，糖作为碳源和能源用于合成细胞成分和合成反应所需要的能量。 尿素被脲酶分解放出氨使pH值上升，氨被菌体利用可使pH值下降，这时需及时补加尿素，补充氮源和调节pH值。 初级代谢的代谢变化 由于菌体代谢活动放出热，温度开始上升。一般发酵5h左右温度上升，应注意降温。 由于菌体不断增加，代谢旺盛，产生CO2，排气中CO2浓度显著增加。 耗氧量很快增加，培养基中的溶解氧下降，排气中的O2浓度也下降，应根据情况提高风量。特别是在对数生长期的末期。应注意风量，促进菌体转化。此时为长菌阶段，极少产谷氨酸，控制发酵条件以有利于长菌。但在对数生长期的末期要加大风量，供给充足的氧，并及时流加尿素，供给充分的氮源，促进增殖型菌体向生产型菌体转化。 初级代谢的代谢变化 在生物素限量的情况下，部分菌体内的生物素含量由“丰富转向贫乏”，此部分菌就停止繁殖，在条件适宜时，开始伸长、膨胀，形成生产型细胞，开始积累谷氨酸。但是出于菌体增殖并非完全同步，还有部分菌体为增殖型，这是菌体由增殖型向生产型转化的时期，约需10—18h。在此期间，菌体数量达到最大值，培养液的OD值与菌体增殖不一致，OD值除反映菌体增殖外，还反映了菌体的伸长、膨大。 初级代谢的代谢变化 这是代谢最旺盛的时期，耗糖加快，谷氨酸生成迅速增加，耗氧速率加快，并接近最大值。发酵控制方面必须充分供氧，风量达最大值，充分供给氮源。对发酵控制来讲，此时以前的控制是发酵成败的关键。此时期的变化受生物素和风量的明显影响。一般来说，加大风量对菌体的伸长、膨大有促进作用，菌体完成由增殖型向生产型转化后，菌形几乎都伸长、膨大、边缘不整齐、像花生型。 初级代谢的代谢变化 大量积累谷氨酸，耗糖与产酸相适应，产酸达最大值，对糖的转化率达50％一56％，应继续流加尿素，保证充足的氮源，pH值维持7.0-7.2。为加快产酸速度适当提高温度，一般为36-37℃。根据菌体耗氧速率继续供氧。 随着发酵的延长，糖已耗尽，产酸增加，菌体活力逐渐降低。发酵后期耗氧减少，可适当降低风量。流加尿素以少量为好，控制pH＝6.8-7.0。当残糖降到1％，根据发酵情况可将风量降到最低，促进中间产物转向谷氨酸。 次级代谢的代谢变化 次级代谢产物包括大多数的抗生素、生物碱和微生物毒素等物质。按动力学模型分类，它们的发酵属于菌体的生长与产物非偶联的类型，也就是说，菌体生长繁殖阶段(又称生长期)与产物形成阶段(又称生产期)是分开的。 次级代谢的代谢变化(以抗生素发酵为代表)如图所示，一般分为菌体