六吖啶橙染色检测细胞凋亡.pptVIP

实验六 吖啶橙染色检测细胞凋亡 实验目的与要求 1、掌握吖啶橙染色检测细胞凋亡原理和操作方法 2、掌握荧光显微镜的原理与操作方法 凋亡的起始：细胞表面特化结构消失，细胞皱缩，内质网膨胀与质膜融合，染色质固缩和降解。 凋亡小体形成：细胞核分裂，与细胞质一起形成芽状突起，逐渐与细胞分离。 凋亡小体被吞噬： 吖啶橙染色原理 吖啶橙(Acridine Orange) 是一种荧光染料，它与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。在蓝光(约502nm)激发下，细胞核发亮绿色荧光(约530nm)，核仁和胞质RNA发桔红色荧光(＞580nm)。吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、RNA两种核酸。 正常细胞核因含DNA显示黄绿色荧光，细胞质与核仁都显示橘红色荧光，细胞体积较大且铺展。凋亡细胞体积明显缩小，核呈黄绿色，断裂为多个碎块状，无核仁，碎裂的核由膜包裹着凸起于细胞表面呈黄绿色。 荧光显微镜的成像原理 荧光显微镜是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 物质吸收短波光，发射出的长波光。 反射荧光显微镜的构造 落射荧光显微镜各部件特性和作用 落射荧光显微镜各部件特性和作用 反射荧光显微镜原理 滤色镜的选