第八章-细胞凋亡-课件.ppt

Apoptotic HeLa cells were stained with FITC-AnnexinV + PI 3、线粒体膜势能（??mt）的检测 线粒体荧光染料：Rhodamine 123、DiOC6（3）、JC-1、TMRM等对线粒体膜电位非常敏感，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。 4、DNA片段化分析 细胞凋亡时染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成180?200bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。 5、TUNEL法 6、Caspase活性检测 7、凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达 和细胞定位分析 凋亡早期TFAR19表达↑并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时间，在凋亡小体中仍然可见。 利用荧光素（FITC）标记的TFAR19单克隆抗体为探针进行TFAR19蛋白的细胞定位分析 Double staining analysis of nuclear localization of TFAR19 in K562 and HeLa cells treated with VP16 * * * Pro-caspase-2 caspase-2 Pro-caspase-6 Caspase-6 Pro-caspase-7 caspase-7 Pro-caspase-9 ICAD（抑制性 CAD） CAD（ caspase活化DNA酶） CDA进入细胞核内降解DNA 细胞凋亡 剪切细胞内结构蛋白 caspase-9 Effector caspase Caspase-3 Pro-caspase-3 Caspase的作用 Caspase非依赖的细胞凋亡 （Caspase-independent apoptosis） ■凋亡诱导因子（AIF） 线粒体蛋白AIF释放到胞质内与抑制凋亡的因 子结合，从而促发凋亡 ■钙超载 钙超载引起凋亡机制 胞浆[Ca2+] ↑ ■激活核转录因子，加速凋亡相关基因的转录 ■激活Ca2+/Mg2+依赖的核酸内切酶，降解DNA链 ■激活谷氨酰胺转移酶，使细胞骨架分解→凋亡小体 细胞凋亡 细胞凋亡的调控 凋亡相关因素 凋亡信号的转导 凋亡相关基因 （The mainly induced factors of apoptosis） Table：Influence factors of apoptosis 诱导性因素（Inducers） 抑制性因素（Inhibitors） 理化因素 射线、高温、强酸、 细胞因子 IL-2、NGF等 强碱、应激、抗癌药 激素 ACTH、睾丸酮、雌激素 激素和因子 糖皮质激素、TNF 其它 Zn2+、苯巴比妥、半胱氨 免疫性因素 CTL分泌的粒酶 酸蛋白酶抑制剂、EBV、 病原体因素 HIV、HCV 牛痘、病毒、中性氨基酸 1、影响细胞凋亡的因素 2、凋亡信号转导的特点 ①多样性：不同种类细胞有不同的信号转导系统 ②偶联性：死亡信号转导系统与细胞增殖、分化过程 中的信号转导系统在一些环节上交叉、偶联 ③同一性：不同凋亡诱导因素可通过同一信号转导系 统引起细胞凋亡 ④多途性：同一凋亡诱导因素可经过多条信号途径触 发细胞凋亡 3、细胞凋亡的调控基因  （Regulated mechanism of apoptosis） 表 1 细胞凋亡的调控基因 功能 基因 抑制凋亡基因 Bcl-2 Bcl-XL、A1/Bfl-1、Bcl-w、Bcl-G和Mcl-1等 促凋亡基因 P53、Bax、Bad、Bak、Bid、Bim、Bik、Bok、 Bcl-B、Bcl-Xs、Krk、Mtd、Nip3、Nix、Noxa等 双向调