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 研 究 生：XXX 导 师：XXX高级工程师 专 业：12级中药学 研究方向：抗肿瘤药物研究 课题来源：黑龙江省自然科学基金项目 一.研究目的和意义 二.实验内容及结果 三.结论 四.讨论 五.致谢 一、研究目的和意义 肿瘤是目前危害人类健康的主要疾病之一。近年来，有研究表明，石蒜碱对多种肿瘤细胞具有抑制作用，其可以通过线粒体途径，死亡受体途径诱导肿瘤细胞的凋亡，但药物进入细胞内发挥作用必须先通过细胞膜，而在此过程中细胞膜上生化物质又会发生改变，从而影响其膜上结构及其膜结构所具有的生理功能，进而触发下游的凋亡途径，因此本课题以H22肿瘤细胞为研究对象，实验采用体内方法，研究其抗肿瘤机制，对新药研发具有重要意义。 二、实验内容及结果 实验结果表明，石蒜碱对荷瘤小鼠的免疫器官的在一定程度上产生影响，但不是很明显，所以可以说明，在适当的药量条件下，石蒜碱并不会破坏机体本身的免疫系统。 2.石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜组分的影响 2.1 石蒜碱对对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜蛋白的影响 H22荷瘤小鼠模型的建立；分组及给药；停药后次日处死小鼠，抽取腹水，对肿瘤细胞的处理。采用考马斯亮蓝法对蛋白含量进行测定。 测定的吸光度（A）值按下列公式计算出蛋白含量： 待测样本蛋白浓度(g/L)=[(测定管-空白管) / (标准管-空白管)]×标准品浓度(0.563g/L) 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜蛋白含量的影响 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜蛋白含量的影响 实验结果表明，高、中剂量组比羟基喜树碱组的影响效果更为明显。随着给药剂量的增加，荷瘤小鼠肿瘤细胞细胞膜的蛋白含量减少，荷瘤小鼠肿瘤细胞膜蛋白含量与给药剂量呈负相关状态。 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸含量的影响 实验结果表明，石蒜碱各剂量给药组与空白对照组比较，差异显著。从而说明石蒜碱可以降低荷瘤小鼠肿瘤细胞细胞膜唾液酸的含量，荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸含量与药物呈剂量依赖关系，随着给药浓度的增加，肿瘤细胞细胞膜唾液酸含量减少，并显著降低其含量，其含量与剂量给药具有一定的负相关性。 2.3 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜胆固醇含量的影响 H22荷瘤小鼠模型的建立；分组及给药；停药后次日处死小鼠，抽取腹水，对肿瘤细胞的处理。采用总胆固醇含量测定试剂盒对胆固醇含量进行测定。 测定的吸光度（A）值按下述公式进行计算，得出实验各组细胞膜上胆固醇含量： 总胆固醇含量(mmol/L)=[(测定管-空白管)/(标准管-空白管)]×标准液浓度(5.17 mmol/L)÷蛋白含量(mgprot/mL) 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜胆固醇含量的影响 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜胆固醇含量的影响 实验结果表明，石蒜碱各剂量给药组与空白对照组比较，差异显著。从而说明石蒜碱可以降低荷瘤小鼠肿瘤细胞细胞膜胆固醇的含量，荷瘤小鼠肿瘤细胞膜胆固醇含量与药物呈剂量依赖关系，随着给药浓度的增加，肿瘤细胞细胞膜胆固醇含量减少，并显著降低其含量，其含量与剂量给药具有一定的负相关性。 3.石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜功能的影响 3.1石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜ATP酶活性的影响 H22荷瘤小鼠模型的建立；分组及给药；停药后次日处死小鼠，抽取腹水，对肿瘤细胞的处理。ATP酶活性按照ATP酶活性试剂盒进行操作。 根据测定吸光度（A）值计算ATP酶活性，计算公式如下： ATP酶活性=[(测定管-对照管)/标准管]×标准管磷浓度×反应液中样品稀释倍数×6/匀浆蛋白浓度 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜ATP酶活性影响 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜ATP酶活性影响 实验结果表明，与空白对照组比较，石蒜碱各剂量组均具有显著性差异，由结果说明石蒜碱高、中剂量组均可降低荷瘤小鼠肿瘤细胞膜的ATP活性，导致肿瘤细胞膜内外物质转运等功能发生障碍，进而引起肿瘤细胞代谢发生紊乱。 3.2 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性的影响 H22荷瘤小鼠模型的建立；分组及给药；停药后次日处死小鼠，抽取腹水，对肿瘤细胞的处理。采用荧光偏振法对细胞膜的流动性进行测定，对处理好的细胞进行荧光标记，使用荧光分光光度计进行测定。 分别测定与激发偏振光振动方向平行和垂直时荧光偏振光强度I11、I⊥。将测量结果进行荧光偏振度P值得计算，即P=(I11—I⊥)/(I11+I⊥)，并计算微黏度η=2P/(0.46—P)及流动性LFU=(0.5—P)/P2。 石蒜碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性的影响