第五章-酶的固定化.pptVIP

* ① 固定化酶的形状 颗粒状或片状固定化酶对连续流搅拌桶式反应器和填充式反应器类型的反应器均可适用。 膜状和纤维状的固定化酶适用于填充式反应器。 固定化酶易变形、易粘结或颗粒细小时，宜采用流动床反应器。如果用填充式反应器，往往会引起高的压力降和堵塞床层，并且在大规模生产中无法实现高的流率。 * ②底物的物理性质 底物分三种情况：溶解性物质、颗粒物质与胶状物质。 溶解性底物显然对任何类型反应器均不会造成困难。 颗粒状和胶状底物则往往会导致床层堵塞，对此可用循环反应器或流动床反应器。 连续流搅拌桶式反应器只要搅拌速度足够高，能维持底物和固定化酶良好的悬浮状态，也可用于颗粒状底物。但高的搅拌速度会导致固定化酶从载体上被剪切下来，所以转速不能太高。 * ③酶反应动力学特性 一般而言，填充床反应器在固定化酶反应器中占有主导地位，它适合于产物抑制的场合；但在底物抑制的系统中，则连续流搅拌桶式反应器的性能又优于填充床。流动床反应器因其流动特性接近连续流搅拌桶式反应器，故也适宜于底物抑制的反应。 * ④酶的稳定性 在反应器操作过程中，由于搅拌浆或液流的剪切作用，常会使固定的酶从载体上脱落下来，或由于磨损，引起粒度的减小而影响固定化酶的操作稳定性，其中尤以连续流搅拌桶式反应器最为严重。 为解决这一问题而改进反应器设计，是把酶直接粘接在搅拌轴上，或把固定酶设置在与轴相连的金属网篮内。 * ⑤操作要求及反应器费用 连续流搅拌桶式反应器是最便宜的，它结构简单，且具有良好的操作性，适应性强；而其他类型的反应器，则都需为特定的生产过程专门设计和制造。在讨论反应器价格的同时，还应该考虑固定化酶本身的费用，及在各种反应器中的稳定性。 * （2）酶反应器使用中应注意的问题 酶的稳定性对酶反应器的功效是很重要的。在操作过程中，有时需要用酸或碱来调节反应液PH。如果局部的pH过高或过低，就会引起酶的失活，或者使底物和产物发生水解反应。这时，可用加快搅拌已促使混合均匀。 如果底物和产物在反应器中不够稳定，可以采用高浓度的酶，以减少底物和产物在反应器中的停留时间，从而减少损失。 防止微生物污染 酶反应器操作中，生产能力逐渐降低，主要原因是固定化酶活性降低或损失。造成固定化酶活性损失的原因： （1）酶本身的失活； （2）酶从载体上脱落； （3）载体的破碎或溶解。 * 5 酶反应器的设计 1、确定酶反应器的类型 酶反应器的设计，首先要根据酶、底物和产物的性质，按照酶反应器的选择原则，选择并确定反应器的类型。 2、确定反应器的制造材料 由于酶催化反应具有条件温和的特点，通常都是在常温、常压、pH近乎中性的环境中进行反应，所以酶反应器的设计对制造材料没有什么特别要求，一般采用不锈钢制造反应容器即可。 * 3、进行热量衡算 酶催化反应一般在30～70℃的常温条件下进行，所以热量衡算并不复杂。温度的调节控制通常采用一定温度的热水通过夹套（或列管）加热或冷却方式，热量衡算是根据热水的温度和使用量计算。对于某些耐高温的酶，例如高温淀粉酶，可以采用喷射式反应器，热量衡算时，根据所使用的水蒸气热焓和用量进行计算。 4、进行物料衡算 酶反应动力学参数/底物用量/酶量/反应体积/反应器数量 * 6 酶反应器的发展 含有辅助因子再生的酶反应器 问题由来： 许多酶反应都需要辅因子的协助，如辅酶、辅基、能量供给体等。这些辅因子价格昂贵，需再生循环使用才能降低成本，因而发展了辅因子再生酶反应器。 例： 利用固定化脱氢酶可将固定化NADH再生为NAD。依靠半透膜能将固定化NAD保留在反应器内，实现了NAD的再生与循环使用。 * 2. 两相或多相反应器 问题由来： 许多底物不溶于水或微溶于水，如脂肪、类脂肪或极性较低的物质，进行酶反应时有浓度低，反应体积大，分离困难、能耗大的缺点。 解决办法： 使酶反应在有机相中进行，可增加反应物浓度，还可减少底物，特别使产物对酶的抑制作用。 * 3. 固定化多酶反应器 将多种酶固定化后，制成多酶反应器，模拟微生物细胞的多酶系统，进行多种酶的顺序反应，来合成各种产物，目前此技术还处于实验阶段，但发展前景良好。 1）可组成高效率，巧妙的多酶反应器。 2）构建全新的酶化学合成路线，生产人类所需的、自然界不存在的物质。 3）代替微生物发酵，用小型柱式反应器取代庞大的微生物发酵罐。 4）化工厂、制药厂高大反应塔和密如蛛网的管道将由简单巧妙的生物反应器取代。 * 本章复习题 1. 酶固定化的意义。 2. 酶的固定化及各种固定化方法的特点？ 3. 影响固定化酶性质的因素有哪些？ 4. 酶固定化后活力下降及稳定性提高的原因是什么？ 5. 简述固定化酶反应器的类型和