高效液相色谱操作基础知识拓展.ppt

高效液相色谱知识 一、液相色谱的原理 二、HPLC的特点 三、HPLC 的组成 四、流动相 五、缓冲溶液的作用 六、梯度洗脱的流动相调整 七、遇到问题的解决 八、气相与液相的区别 上海波粒仪器科技有限公司友情供 一、液相色谱的原理 原理：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出 。(反相色谱中，溶质按其疏水性大小进行分离，极性越大疏水性越小的溶质，越不易与非极性的固定相结合，所以先被洗脱下来) 正相色谱：流动相使用非极性的疏水性溶剂（流动相极性＜固定相极性），常用于分离中等极性或极性较强的化合物（如酚类、胺类、酸基类及氨基类）;流出峰顺序为极性小的先流出。 反相色谱：流动相极性＞固定相极性；流出峰顺序为极性大的先流出 上海波粒仪器科技有限公司友情供 二、HPLC的特点 ①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。　　②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。　　③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。　　④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分