人造精子与CRISPR-Cas9-生命科学.PDFVIP

第27卷第12期 生命科学 Vol. 27, No. 12 2015年12月 Chinese Bulletin of Life Sciences Dec., 2015 DOI: 10.13376/j.cbls/2015208 文章编号：1004-0374(2015)12-1489-05 ∙ 发现的历程∙ 编者按：小鼠单倍体胚胎干细胞系的建立为遗传学的正反向筛选提供 了一种简便而又有效的工具。除此之外，孤雄单倍体胚胎干细胞能替 代精子使卵母细胞“受精”这一特性，更是实现了从细胞水平向动物 水平的完美转变。无论是从制备多基因遗传操作动物模型的角度，还 是在小鼠个体水平遗传筛选的层面，孤雄单倍体胚胎干细胞的出现都 将为基因功能学研究带来新的生命力。然而，孤雄单倍体的“受精” 能力极其有限，其产生健康半克隆小鼠的效率仅约2% ，这也成为孤雄 单倍体在个体水平广泛应用所面临并且亟需突破的一大瓶颈。通过正 反面的实验验证，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生 物学研究所李劲松课题组发现，雄性印记区域H19-DMR 和IG-DMR 的异常去甲基化是半克隆小鼠发育异常的“祸根”。通过敲除这两个 DMR ，成功将半克隆小鼠的出生效率提高至20% ，为利用孤雄单倍体 获得多基因遗传操作动物模型提供了最根本有力的保障。最后，结合 CRISPR-Cas9 技术，他们创建了孤雄单倍体的sgRNA 文库，并成功将 此“细胞文库”转化成携带基因突变的“小鼠文库”，由此创建了“个 体水平”遗传筛选的新方法、新思路。 “人造精子”与CRISPR-Cas9 钟翠青*，李劲松 ( 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海 200031) 近几年，小鼠单倍体胚胎干细胞的相关研究进 通过卵母细胞注射的方法进一步得到遗传修饰的小 行得如火如荼。2011 年，Anton Wutz 和 Josef M. 鼠模型。利用此方法可以减少后代反复交配所耗费 Penniger 两个研究团队相继建立了小鼠的孤雌单倍 的时间和产生的工作量。然而，研究发现ICAHCI 体胚胎干细胞，并成功将这种单倍体细胞运用于遗 产生半克隆小鼠的效率极低，并且进行遗传操作之 传学的正向和反向筛选[1-3] 。随后，李劲松研究员 后孤雄单倍体的“受精”能力会进一步下降，这让 和周琪研究员带领的研究团队先后在体外获得了小 孤雄单倍体在制备遗传操作小鼠上的运用遇到了一 鼠的孤雄单倍体胚胎干细胞[4-5] 。研究表明，这种 个无法逾越的障碍[4-6] 。 ( CRISPR-Cas9 孤雄单倍体可以通过卵母细胞注射的方法 称为 与此同时， 技术的出现为实现基 ICAHCI ) 技术 代替精子使卵母细胞发生“受精”， 因编辑的高效性和简便性带来了光明，也大大推进 (SC ) [7-9] CRISPR-Cas9 进而产生后代——