二细菌的生长繁殖消毒与灭菌.ppt

细菌感染的检测 实验二 细菌的生长繁殖、 消毒与灭菌 一、讨论： 1、消毒灭菌的方法、实验室生物安全 2、细菌的人工培养：培养基、细菌培养技术、细菌生长现象 二、示教： 1、消毒灭菌的常用方法 2、药敏实验 3、培养基制备、种类、用途 4、细菌生长现象观察 三、操作：细菌的接种（液体、半固体、固体培养基） (一）消毒灭菌方法、实验室生物安全 1. 常用术语 消毒(disinfection)：利用理化因素杀死物体或环境中病原微生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 灭菌(sterilization)：利用理化因素杀死物体上所有微生物的过程，包括芽胞。 无菌操作（aseptic technique)：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 （2）常用方法 物理消毒灭菌法： 热力灭菌法：干热灭菌法、湿热灭菌法 辐射杀菌法：电离辐射--X、β、γ射线 非电离辐射--紫外线、日光、微波 滤过除菌法：滤过除菌法 干燥低温抑菌法：抑菌和灭菌 化学消毒灭菌法： 生物消毒灭菌法 热力灭菌法 干热灭菌 焚烧、烧灼、 红外线 干烤（160~170℃/2h） 热力灭菌法 湿热灭菌 巴氏消毒法：62℃30min 或72℃ 30sec 煮沸法 30min 流动蒸气消毒法 间歇蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法：121℃,1.05Kg/cm2(15个大气压),20min 辐射杀菌法 辐射杀菌法：非电离辐射 滤过除菌法 2、化学消毒灭菌法 常用消毒剂(disinfectants)的杀菌机制 使菌体蛋白变性或凝固 干扰微生物酶系统和影响其代谢 损伤细胞壁、细胞膜 医学上常用消毒剂类型作用机制及种类 化学消毒灭菌法 医疗器械物品的消毒灭菌 室内空气消毒灭菌 手和皮肤的消毒 消毒灭菌的方法 3、实验室生物安全 事故引发的生物危害 是由进行病原体研究、教学、诊断、治疗、生物制品研发和生产等机构的事故导致病原体泄漏，引发了传染病暴发的生物灾害。这类生物灾害往往影响较大，危害范围小，造成局部灾害大，持续短 1979年，苏联国防微生物与病毒研究所炭疽芽孢干粉制剂车间的加压系统爆炸，约10公斤芽孢粉剂泄漏，造成斯维尔德洛夫斯克城数百人伤亡。 2003年9月新加坡国立卫生研究院BSL－3实验室发生研究人员感染SRAS病毒的事故。 2003年12月我国台湾省一实验室也发生了研究人员感染SRAS病毒的事故， 2004年4月我国国家CDC的专业实验室发生了SARS的实验室人员感染。 病原微生物分类管理 病原微生物实验室的分级管理 （二）细菌的人工培养： 培养基的概念、种类、用途 细菌培养技术 细菌生长现象 牛肉膏　　　 3.0g 　　蛋白胨　　 　 10.0g　　氯化氯化钠（NaCL）　 5.0g　　磷酸二氢钾（KH2PO4）　 1.0g　　琼脂　　 　 15.0g　　蒸馏水　　　 1000mL　　混匀，加热溶解，调PH至7.6分装，112kPa高压灭菌15min，冷却至45℃倾注灭菌平板。 2. 细菌的培养方法 分离培养：划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开。 纯培养：挑取一个菌落，移种到另一培养基中，可生长出来的大量的纯种细菌。 发酵培养：在适宜的条件下，发酵罐中大量培养微生物（细菌、真菌等）细胞和生产代谢产物的工艺过程。 分离培养： 二、示教： 1、消毒灭菌的常用方法: 物理--热力（干、湿热各两个）过滤器（3-4种）、冰箱、紫外线（两个）、超生波 化学--高、中、低效消毒剂各类型2-3个代表； 2、药敏实验：纸片法 3、培养基的种类：见前解释、观察实物 4、细菌生长现象观察：见前、观察实物 药敏实验：纸片法 三、操作：细菌的接种培养 1. 固体平皿培养基分离接种方法 右手执笔式握持接种环，在酒精灯火焰上烧灼接种环，待冷，取待测菌液一环。 左手抓握琼脂培养基平皿，用手掌将平皿的底固定，用手指将平皿的盖略抬起一些，进行接种。 持接种环在琼脂表面的1区涂布，划线时接种环与琼脂表面呈 30°～40°的角度轻轻接触，利用腕力，切忌划破琼脂表面。 烧灼接种环，待冷后，将接种环在2区、3区划线数次，各线条间隔要小，但不能重叠。 划完3区不需烧灼接种环，在4区作连续划线，如此反复至划完整个平皿（如图3）。 接种完毕，盖好平皿盖，在平皿底玻璃上用记号笔注明标本名称、接种时间、接种者等。 然后将