07实验七SDSPAGE测定蛋白质的分1.pptVIP

实验七 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 测定蛋白质分子量 一、实验目的 学习SDS测定蛋白质分子量的原理 掌握垂直板电泳的操作方法 二、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(methylene-bisacrylamide,简称Bis)在催化剂和加速剂的作用下聚合并联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。 SDS即十二烷基硫酸钠是阴离子去污剂，与大多数蛋白质平均结合比为1.4g SDS/g蛋白质。由于SDS带有大量负电荷，当其与蛋白质结合时，所带的负电荷大大超过了天然蛋白质原有的负电荷，因而消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异，使蛋白质均带有相同密度的负电荷，因而可利用分子量差异将各种蛋白质分开。 在蛋白质溶解液中，加入SDS和疏基乙醇，巯基乙醇可使蛋白质分子中的二硫键还原，使多肽分成单个亚单位。SDS可使蛋白质的氢键、疏水键打开，还引起蛋白质构象的改变。SDS-蛋白质复合物在水溶液中的形状近似雪茄形的长椭圆棒。不同蛋白质-SDS复合物的短轴相同 ，约1.8nm，而长轴则与蛋白质的Mr成正比。 蛋白质分子的迁移速度只取决于分子大小。分子量在15KD到200KD之间时，lgM