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不同载体上脱落细胞的DNA检验在案件侦查中的应用 李 军，臧源云，韦亚妮，张海浪，郑耀斌，梁冬新，敖金福 （柳州市公安局刑侦支队 广西柳州 545001） 摘 要：目的通过统计、比较不同载体脱落细胞检验成功率，提示现场勘查人员重视对检出率较 高的生物检材注意发现提取，在案件侦破中充分利用这些检材。方法统计实验室05－09年所检验的含脱落细胞类检材的检验方法、检验成功率。结果衣物、鞋帽、手套、梳子、刮 胡刀等个人生活用品类检材，各种咬食后食物(果物)、饮料瓶,使用过的绳索等检验成功率高。结论衣物、鞋帽、手套、梳子、刮胡刀、咬食过的食物（果物）、饮料瓶、使用过的绳索等人体接触过的物品能成功进行DNA检验，现场检查勘验时应注意发现提取刑事案件现场勘查中，血斑，精斑，烟蒂等生物检材已得到了现场勘查人员的普遍重视，但由于微量生物检材如接触性DNA检材在现场中不易被发现而常被忽略，致使不少案件丧失破案有力的证据。因而如何更好的利用现场上的微量生物物证对案件侦破有着非常重要的意义。 人体皮肤、粘膜每天都有数10万个细胞老化脱落，脱落上皮细胞通常经过接触转移到其他物体上，并成为刑事案件现场中很重要的一类生物物证来源。脱落细胞附着在各种载体上,未通过检验难以确定其是否存在,因而我们通过对近年来检验过的检材进行统计，总结出可以利用的检材，提高勘查人员现场勘查时发现、提取这类检材的意识。 1实验样本 本实验室2005－2009年案件中涉及到的脱落细胞的检材，分口腔脱落细胞和体表脱落细胞两类。口 腔脱落细胞类检材主要涉及：烟蒂、 餐后擦嘴用纸、饮料瓶口、一次性纸杯、碗筷类，口香糖，果核果皮、甘蔗 渣、牙签等；体表脱落细胞类检材主要涉及：衣帽鞋手套类，绳索类，阴茎擦拭物，刮胡刀、梳子类。 2仪器试剂2.1仪器离心机，恒温仪，9700PCR扩增仪，3100A测序仪， EZ1自动核酸提取仪， 脱落细胞提取仪。2.2试剂及耗材 Chelex-100，DNAIQTM试剂盒， 酚氯仿，无水乙醇，QIAquickPCR纯化试剂盒，microcon-100浓缩管， Identifiler、minifiler、Yfiler试剂盒。 3检材处理及DNA提取3.1剪取法烟蒂、牙刷、口香糖等这类载体检材，可直接用剪刀剪取适量放入EP管，烟蒂剪取过滤嘴的外层纸片大小约为1×5mm，餐后擦嘴纸剪取擦拭部位大小约 5mm×5mm； 食用过的口香糖剪取1/2米粒大小。然后选择采用100-150ulchelex--100+10ulPK法处理得到DNA模板；甘蔗渣可用剪刀剪取适量，用EZ1试剂处理，经EZ1自动工作站提取得到DNA模板。 3.2擦拭法饮料瓶口、一次性纸杯、碗筷类、果核、咬过的水果、牙签、刮胡刀等这类载体检材，可采用纱线二步擦拭法提取脱落细胞：用纯水浸湿的纱线，擦拭载体可能遗留脱落细胞的部位，再用干纱线重复擦拭。如饮 料瓶口、 一次性纸杯载体、碗，可沿着瓶口、纸杯、碗的上缘用浸湿的纱线擦拭一圈，再用干纱线重复擦拭同一部位，将两次擦拭后干、湿纱线放入EP管；而咬过的水果，观察是否有咬痕，如有咬痕，则在咬痕附近用湿、干纱线交替擦拭。如无明显咬痕，则在被咬过的水果缺口处上、下、附近擦拭。此类检材用chelex--100+PK法提取效果就很好。 3.3吸取法衣服、裤子，鞋子、帽子、手套等渗透性检材，可用公安部研发的脱落细胞提取仪提取脱落细胞。如衣服、裤子类载体，用脱落细胞提取仪充分在衣领、袖口、腋窝、裤头、口袋处吸取，而手套类载体，翻转后吸取内面的掌部或手指部位就行。从脱落细胞提取仪上取下的三层滤膜分别用三个PE管处理，如果检材较干净，则用200ul的chelex—100+10ulPK处理，如检材较脏，则用EZ1自动工作站提取，提取的DNA模板最后经microcon-100浓缩成终体积10-20ul。 3.4DNA模板浓缩纯化 对于体表脱落细胞类检材，经用各种方法如chelex-100、EZ1法、DNAIQTM试剂盒等方法提取到的脱落细胞DNA模板，大多数需要经microcon-100管浓缩DNA模板，而口腔脱落细胞类检材不用浓缩亦可取得良好结果，如经第一次检测，出峰不齐或出现漏扩现象，则浓缩，则效果改善明显。 3.5扩增 本实验室常用的试剂盒为Identifiler、minifiler、Yfiler试剂盒，常用的扩增体系为10ul，DNA模板为1ul，对于口腔脱落细胞检材，80%以上的检材单独选 用或联合运用Identifiler、minifiler试剂盒扩增， 均能取得13个位点以上的正确分型。对于体表脱落细胞类 检材，如衣物、 鞋帽、手套检出率以及正确分型也达到65%以上， 而对于各种载体上的残缺指纹或掌纹，检出率相对低一些，不足40%。 3.6检测 扩增产物用3100A测