第十二章 发酵的污染与防治.ppt

第十二章 发酵污染与防治 第一节 发酵染菌危害 ——产物收得率低； ——产品质量差； ——浪费原材料； ——经济效益差； ——造成环境污染。 污染时间对发酵影响 1.种子期染菌：危害极大，应严格防止。 ——措施：一旦发现，均应灭菌后弃去，并对种子罐及其管道进行彻底灭菌。 2.发酵前期染菌：前期养分丰富，易染菌。 ——措施：将发酵液在补足必要养分后迅速灭菌，重新接种发酵。 3.发酵中期染菌：严重干扰生产菌代谢，影响产物生成，使菌体自溶，有时还会使已形成的产物被利用或破坏。 ——措施:具体处理方法应根据各种发酵的特点和情况来决定。 4.发酵后期染菌：此时产物积累已较多，养分已接近耗尽。 ——措施：若染菌量不多，可继续发酵；若污染严重，可提前放罐。 第二节??生产中杂菌检查与防治 一、杂菌检查与判断 二、杂菌污染原因分析 1．显微镜检查 优点：简便、快速，能及时检查出杂菌。 缺点： （1） 对固形物多的发酵液检查较困难； （2） 对含杂菌少的样品应多检查几个视野； （3） 由于菌体较小，又处于非同步状态，应注意区别不同生理状态下的生产菌与杂菌，必要时可用革蓝氏染色、芽孢染色等辅助方法鉴别。 一、杂菌检查与判断 2．平板检查 优点：（1）适于固形物多的发酵液； （2）形象直观，肉眼可辩，不需仪器。 缺点：（1）所需时间较长，至少8小时； （2）无法区分形态与生产菌相似杂菌； （3）检查过程需严格执行无菌操作。 3．肉汤培养检查 主要用于空气过滤系统和液体培养基无菌检查 将葡萄糖酚红肉汤培养基装在吸气瓶中，灭菌，37℃培养24h。若培养液未变混浊，表明吸气瓶中培养液无菌；再将过滤后空气引入吸气瓶，培养，若变混浊，表明空气中有杂菌；说明过滤系统有问题。 4．发酵过程异常现象判断 （1）溶解氧水平异常； （2）排气中CO2异常； （3）pH变化及菌体酶活力异常。 二、杂菌污染原因分析 （1）种子带菌 （2）无菌空气系统染菌 （3）培养基灭菌不彻底 （4）设备管道灭菌不彻底 （5）设备管道系统渗漏 造成杂菌污染主要原因: ——设备问题为主，如设备渗漏、管道不严密、设备中存在死角、空气过滤系统失效等； ——其次是种子（主要是二级种子）染菌， ——培养基灭菌不彻底造成染菌极少发生。 第三节??噬菌体的污染和防治 一、噬菌体污染的特征 二、噬菌体的检查方法 三、噬菌体的防治 四、污染噬菌体抢救措施 1.发酵液光密度上升缓慢，甚至下降，肉眼可见发酵液逐渐变清； 2.耗糖速度缓慢或停止，产物生成量少或不增加，发酵液中残糖高； 3.产生大量泡沫，发酵液呈粘稠状； 4.菌体不规则，甚至出现畸形。 一、噬菌体污染的特征 1.双层琼脂平板法 （1）双层琼脂平板的制备：先用7～8mL 2%的琼脂培养基作底层，凝固后，加入3～4mL 冷至45℃的1%琼脂上层培养基（其中含0.2mL发酵菌种悬液和0.1mL待检发酵液），让其平整凝固； （2）在发酵菌的适宜温度下培养，若是细菌，一般培养16～20小时。 （3）检查有无透明的噬菌斑。 二、噬菌体的检查方法 2.液体培养检查法 将培养基、发酵菌种及待检发酵液混合，培养是否变清。 3.斑点试验法 先制备好涂布有发酵菌种平板，再用接种环或无菌吸管 取少许发酵液在平板上点种，培养观察是否有噬菌斑。 4.玻片快速法 将发酵菌种、发酵液和少量琼脂培养基（含0.5～0.8%琼 脂）混匀后涂布于无菌载玻片上，经短期培养后，在低 倍镜下观察是否有噬菌斑。 二、噬菌体的检查方法 发酵液中污染噬菌体，不外乎有两种原因。 1.菌种本身带噬菌体，特别是溶源性噬菌体，对这种菌种，一经发现，应立即弃去。 2.生产的环境中有噬菌体。 三、噬菌体的防治 预防措施 1.决不使用可疑菌种； 2.清除周围环境中存在的噬菌体。能灭菌的灭菌，能消毒的消毒，搞好清洁卫生工作； 3.选育抗噬菌体菌株； 4.轮换使用菌株。因为一个菌株用的时间一长，就有可能出现该菌种的噬菌体； 5.注意通气质量。取风口应设在30～40米的高空，空气过滤器要保证质量； 1. 发酵前期污染噬菌体 ——补加抗性种子，并根据发酵液中的营养多少，适当补加营养物质； ——补加约50%已培养至对数期正常发酵液，再进行发酵； ——若噬菌体轻度污染，菌体仍能较正常生长，并积累代谢产物，则可照常发酵，若污染严重，则用加热法（70～80度）灭活噬菌体或放罐后重消毒； 四、污染噬菌体抢救措施 2.发酵中后期污染噬菌体 ——应提前放罐，尽快提取产物。发酵罐、管道、洗涤水及用具均应彻底灭菌，防止噬菌体扩散而造成新